氯离子对东方拟无枝酸菌发酵产物的影响.docxVIP

氯离子对东方拟无枝酸菌发酵产物 的影响 【摘要】本文研究了氯离子对东方拟 无枝酸菌发酵产物的影响。 在常规培养条件 下，改变发酵培养基中氯离子存在形式或是 添加抑氯剂和漠化钠，都发现了新组分无氯 万古霉素(didechlorovancomycin , DDCV)勺 产生。通过对培养基中添加抑氯剂的量的改 变，发现加入% 2筑基苯骈嚓口坐和％M化钠 时万古霉素产量降至对照的 6%而DDCV勺 相对含量达到62% 【关键词】 无氯万古霉素； 抑氯剂； 漠 化钠 ABSTRACT This study focused on the effect of chorine on the fermentation products of Amycolatopsis orientalis. Changing the form of inorganic salt of Chloride anion or adding its inhibitor and NaBr into the medium, a new component didechlorovancomycin (DDCV) was found. An optimum fermentation medium was obtained in which % inhibitor and % NaBr was added, while the vancomycin yield decreased to 6%, and the relative content of didechlorovancomycin was reached up to 62% as compared to the control respec tively. KEY WORDSidechlorovancomycin (DDCV); Inhibitor of Cl; Sodium bromide 收稿日期：2007 09 03修回日期： 2007 11 27 作者简介：周雨朦，女，生于 1982年，在 读硕士研究生。*通讯作者， E mail:hongwr56@ 万古霉素(vancomycin) 是由东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis) 发酵产生的一种糖肽类抗生素 ,是目前临床上用于治疗耐甲氧西林金 葡菌(MRSA月|起的严重感染的重要药物 [2] 但是，随着耐万古霉素的金葡菌(VRSA)和肠 球菌(VRE)的出现，导致临床上治疗感染性 疾病又出现了新的棘手问题， 严重威胁着人 类的生命健康。我们从研究万古霉素的结构 类似物入手，寻找新的对耐药菌更有效的药 物。 在研究万古霉素组分的过程中，在某培养 基的发酵产物中发现了一个含量较低的未 知组分，针对该组分进行研究，最终确定此 组分为无氯万古霉素 (didechlorovancomycin , DDCV)在发酵优 化方面，借鉴工业上生产四环素的方法， 在 培养基中添加抑氯剂和氯的竞争性抑制剂， 可获得较高产量的无氯万古霉素。 1材料与方法 菌株 东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)HCCB10007( 上海来益生物药物 研发中心保藏)。 试剂和仪器 本实验所用试剂纯度均为分析纯，购自国 药集团化学试剂有限公司。HPL通号： Agilent 1100 Series 公司；MSS号：Q T0F micro (Waters 公司)。 培养基 斜面培养基 高氏一号合成培养基。 种子培养基(%)可溶性淀粉， 黄豆粉, 葡萄糖，硝酸钾，磷酸二氢钾，硫酸镁；消 前。 发酵培养基(％，自来水配制)甘油，硝 酸钾，磷酸二氢钾，氯化镁，碳酸钙；消前。 培养条件 斜面培养条件 培养温度28C,相对湿 度40吩60% 培养5d。 种子摇瓶培养条件 培养温度28 C，相 对湿度40吟60%装量25ml/250ml三角瓶， 摇床转速220r/min，培养48h。 发酵摇瓶培养条件 培养温度28 C,相 对湿度40吟60%装量25ml/250ml三角瓶， 摇床转速220r/min，接种量8%培养120h。 无氯发酵实验、组分取代实验和抑氯剂添 加试验 无氯发酵实验 以发酵培养基作为对照， 用去离子水配制发酵培养基，考察以等量的 硫酸镁取代氯化镁对万古霉素及其他组分 合成的影响。培养条件同。 组分取代试验以发酵培养基作为对照， 用去离子水配制发酵培养基，分别考察以等 量的硫酸镁、氯化钠、氟化钠、漠化钠代替 氯化镁对万古霉素及其他组分合成的影响。 培养条件同。 抑氯剂添加试验以发酵培养基作对照， 然后在对照培养基中加入不同浓度的 2筑 基苯骈嚓哇和漠化钠，考察添加物对发酵结 果的影响。培养条件同。 发酵组分和效价测定 发酵液中万古霉素及其相关产物