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外周血白细胞的分离：（细胞分离液有市售，有各种型号：白细胞、 单核细胞淋巴细胞等分离液） 1＞取3ml正常人的外周血（枸椽酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小 心的加于6ml白细胞分离液液面上，1500r/min离心20 min。（或 先将抗凝血离心，然后吸取中间白细胞层，再混以等体积pbs然后小 心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上） 2＞吸取中间云雾状白细胞，加 3-4mlPBS后3000 r/min离心10 min。 3＞弃上清，加1ml PBS洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至 1.5mLEp 管中。 4＞ 3000r/min 离心 20 min ,弃上清。 即得白细胞 可以试试红细胞裂解液 提供我的配方： 氯化铉82.9克；重碳酸钾10.0克；EDTA0.37克；用三蒸水配成 1升 所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则 分层后的确有3层，准确说来是4层，最下面是红细胞，上面的一层不应该是稍微混浊的白色，应该也 比较透明，这一层上面就是我们需要的薄细胞层，最上面是血清 细节： 淋巴细胞分离液要避光保存 就您的试验看来，淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的 首先再离心管中加入淋巴细胞分离液，然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上，一定要缓慢小心操 作，切不可混匀 所有操作都应在无菌环境进行 把离心管放入离心机是也应小心，不要太大幅度的摇幌离心管，当然离心后拿出来也要小心 就这么多了吧，这个操作是不是很难的，比较基本 祝您好运了! .参考方法： 人外周血，肝素抗凝（100U ?m l）,等量无血清培养液（或者 PBS等缓冲液）稀释。按1 ： 2的体积比缓置 于比重1.077 g/m l的淋巴细胞分离液，1000 枣 离心 30 m in,收集培养液2分离液界面上的单个核细胞。于无血清培养液 ，400 g离心10 m in,洗涤2次。 用培养液重新悬浮细胞并计数 我也是最近要做所以查了一下，仅供分享，呵呵！ 一外周血白细胞的分离 1＞取3ml正常人的外周血（枸椽酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于 6ml白细胞分离液（（33.9% 泛影葡胺和9%Ficoll液按1： 2.4体积比混合））液面上，1500r/min离心20 min。（或先将抗凝血离心， 然后吸取中间白细胞层，再混以等体积 pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上） 2＞吸取中间云雾状白细胞，加 3 — 4mlPBS后3000 r/min 离心10 min 。 3＞弃上清，力口 1ml PBS洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至 1.5mLEp管中。 4＞ 3000r/min 离心 20 min ,弃上清。 即得白细胞 二自然沉降法 本法是利用血畜田胞自然沉降率的分离隹法，探集血液彳务鹿及日寺抗凝，通常邀用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血 酶原^化舄凝血酶，雀而抑制SB隹蛋白原形成SB隹蛋白而防止血液凝固。操作原刖是将含抗凝血的^管直 立静置室温30?60min彳菱，血液分成明II三,上舄淡黄色血橐，底胞，胞上面的 灰白屑舄白布田胞，吸取即得富含白布田胞的备田胞群，离隹心洗源彳灸加入少量蒸直留水或含氯化皴的 Gey溶液, 经短日寺^的低渗虚理，使;tel胞裂解，经遏反彳复洗源可得度段高的白备田胞^液。