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鸡B-型尿钠肽(BNP)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
3 四/L-140 g/L
使用目的:
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中 B-型尿钠肽(BNP)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡 B-型尿钠肽(BNP )水平。用纯化的鸡 B-型
尿钠肽(BNP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 B-型尿钠
肽(BNP),再与HRP标记的B-型尿钠肽(BNP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合 物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作 用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 B-型尿钠肽(BNP)呈正相关。用酶标仪
在450nm波长下测定吸光度 (OD值),通过标准曲线计算样品中 B-型尿钠肽(BNP)浓度。 试剂盒组成
1
30倍浓缩洗涤液
20ml X 1 瓶
7
终止液
6ml x 1 瓶
2
酶标试剂
6ml X 1 瓶
8
标准品(200(_g/L )
0.5ml X 1 瓶
3
酶标包被板
12孔X 8条
9
标准品稀释液
1.5ml X 1 瓶
4
样品稀释液
6ml x 1 瓶
10
说明书
1份
5
显色剂A液
6ml x 1 瓶
11
封板膜
2张
6
显色剂B液
6ml x 1/瓶
12
密封袋
1个
标本要求
标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于 -20 C保存,但应避免反复冻融
不能检测含 NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支, 用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
100 四/L
5号标准品
150 U
的原倍标准品加入150 pl标准品稀释液
50 四/L
4号标准品
150 U
的5号标准品加入150标准品稀释液
25 四/L l
3号标准品
150 U
的4号标准品加入150标准品稀释液
12.5 四/L
2号标准品
150 U
的3号标准品加入150标准品稀释液
6.25 四/L
1号标准品
150 U
的2号标准品加入150标准品稀释液
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂, 其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50此待测样品孔中先加样品稀释液 40此然后再加待测样品10 U (样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置 37 C温育30分钟。
配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸储水 30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂 50 4,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂 A50 4,再加入显色剂 B50U,轻轻震荡混匀,37 C避光显色 15分钟.
终止:每孔加终止液 50叩 终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度( OD值)。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。
操作程序总结:
准备试剂,样品和标准品
加入准备好的样品和标准品,37C反应30分钟
洗板5次,加入酶标试剂.37C反应3。分钟
洗板5次,加入显色液A, B, 37C显色10分钟
加入终止液
SZ
15分钟之内读0D值
计算
计算
以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式, 将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。
注意事项
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值
大于标准品孔第一孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n倍)后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数(X n X 5)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 ^
所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
本试剂不同批号组分不得混用。
如与英文说明书有异,以
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