中药综合检验技术 色谱联用分析方法简介 色谱联用分析法简介.doc

分析化学教研室 第二十章 色谱联用分析法简介 【知识目标】 1．掌握：气相色谱-质谱联用（GC-MS）、高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）基本原理，色谱-质谱全扫描模式及总离子流色谱图、色谱-质谱三维图和质量色谱图；选择离子监测的特点及应用。 2．熟悉：电喷雾和大气压化学离子化仪器接口的工作原理；高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）特点和分析条件。 3．了解：气相色谱-质谱联用（GC-MS）、高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）仪器主要部件；毛细管电泳-质谱联用（CE-MS）、气相色谱-傅里叶变换红外光谱联用（GC-FTIR）、高效液相色谱-核磁共振波谱联用（HPLC-NMR）所提供的信息。 【能力目标】 1．识别：气相色谱-傅里叶变换红外光谱联用（GC-FTIR）、高效液相色谱-核磁共振波谱联用（HPLC-NMR）；毛细管电泳-质谱联用（CE-MS）。 2．理解：气相色谱-质谱联用（GC-MS）、高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）基本原理；色谱-质谱全扫描模式及总离子流色谱图、色谱-质谱三维图和质量色谱图；选择离子监测的特点及应用。 3．应用：气相色谱-质谱联用（GC-MS）、高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）在药物分析研究中应用。 知识链接 知识链接20-1 液相色谱-质谱联用在2008年北京奥运会兴奋剂检测中应用 色谱-质谱联用技术长足进步，使检测复杂生物基质中微量成分成为目前常规检测。2008年北京奥运会完成迄今奥运会历史上规模最大的兴奋剂检查任务，短时间内总计检测兴奋剂近六千例，为此，中国反兴奋剂检测中心使用了十余台液相色谱单四极杆质谱联用仪。 这些仪器对几千份尿样进行利尿剂、掩蔽剂以及其他禁用物质的检测。检测结果准确可靠，检测到有运动员使用利尿剂，并检出世界反兴奋剂机构（WADA）在兴奋剂检查试样中加入的两个控制试样，未出现漏检事故。检测灵敏度比较高，满足WADA的最低检出能力（MRPL）的要求。确保2008年北京奥运会顺利进行。 液相色谱单四极杆质谱仪器工作状态稳定、操作简单、自动化程度高，在数据分析软件中使用编写的MACRO指令，检测数据容易识别和判断。使用这种仪器分析手段检测利尿剂和其他掩蔽剂，是常规和大型运动会兴奋剂检测的良好方法。 色谱联用技术是将色谱仪同定性、定结构分析仪器通过适当接口相结合，借助计算机系统，进行联用分析。联用分析用于复杂试样的定性、定量分析。包括两种色谱分离技术联用的二维色谱法、色谱-色谱联用分析法和色谱-光谱联用分析法。色谱-色谱联用可以提高分离能力，即提高色谱系统对复杂试样的分离能力。本章重点介绍色谱与质谱、光谱联用法。 色谱技术对于多组分复杂混合物，分离能力强、分离效率高、检测灵敏度高，但定性鉴别、确定结构的能力较差；而质谱、红外光谱和核磁共振波谱等技术定性鉴别和结构确定能力很强，但对复杂混合物的定量分析比较困难。因此，将两种分析技术结合起来实现在线联用，可以相互取长补短，以扩大应用范围，获得更多的信息，使分离和鉴定同时进行。 第一节 色谱-质谱联用分析法 色谱仪是质谱法理想的进样器，试样经色谱分离后以纯物质形式进入质谱仪，从而避免复杂混合物同时进入离子源，便于检测；质谱仪则是色谱法理想的检测器，色谱法所用的检测器，如氢火焰离子化检测器、热导池检测器、电子捕获检测器，都具有局限性，而质谱仪能检出几乎全部化合物，灵敏度很高。色谱-质谱联用仪器方框图，如图20-1所示。 图20-1 GC-MS和LC-MS示意图 色谱-质谱联用技术已经应用到石油、化工、医药卫生、有机合成、精细化工、高分子材料、天然有机物等领域。 一、气相色谱-质谱联用（GC-MS） （一）概述 由于气相色谱试样呈气态，流动相也是气体，与质谱仪进样要求相匹配，因此最容易将这两种仪器联用。早在20世纪60年代人们就开始了气相色谱-质谱联用技术的研究，是发展最早、最成熟的联用技术，灵敏度高。该法适合分析的试样需具有一定挥发性，否则需要衍生化和裂解；适合低分子量（小于400）且具有热稳定性的化合物分析。 气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）法是利用气相色谱仪将试样分离为单一组分，组分的保留时间不同，与载气同时流出色谱柱，通过接口，除去载气，保留组分进入质谱仪离子源。各组分分子被离子化，使试样分子转变为离子，在这个过程中，新生的分子离子接受了过多的能量，进一步裂解，生成各种碎片离子。经分析检测，记录为质谱图。 （二）气相色谱-质谱联用仪 气相色谱-质谱联用仪主要由三部分组成：色谱部分、质谱部分和数据处理系统，其示意图，如图20-2所示。 图20-2 气相色谱-单聚焦型质