43酵母细胞的固定化课件严晚英.pptVIP

酵母细胞的固定化 酶制剂特点 ①天然酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶 剂等条件非常敏感，容易失活 ②溶液中酶很难回收，不能再次利用，提高 了生产成本 ③反应后，酶会混在产物中，影响产品质量， 难以在工业生产中广泛应用 （二）固定化酶 固定化酶是指限制或固定于特定空间位置的 酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理， 使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而 又能发挥催化作用的酶制剂 （三）固定化细胞 固定化技术： 将细胞限制或定位于特定空间位 置的方法称为细胞固定化技术 固定化细胞： 被限制或定位于特定空间位置 的细胞称为固定化细胞 固定化酶的应用实例 1 、高果糖浆 ①生产原料 葡萄糖，葡萄糖是由淀粉转化而来 ②生产机理 是以酶法糖化淀粉所得的糖化液，经葡萄糖 异构酶的异构作用，将其中一部分葡萄糖异 构成果糖，由葡萄糖和果糖而组成的一种混 合糖糖浆 ③生产流程 含淀粉 α - 淀粉酶 的浆液 高果糖浆 果糖含量 70% ～ 90% 糊精 糖化酶 葡萄糖 葡萄糖的 葡萄糖 异构化 异构酶 42% ～ 45% 转化成果糖 果糖和葡 反复多次 葡萄糖再 萄糖分离 果葡糖浆 次异构化 （四）直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的优缺点 类型 优点 不足 直接使 催化效率高，低耗能、 对环境条件非常敏感，容易失活； 用酶 低污染等 溶液中的酶很难回收，不能被再 次利用，提高了生产成本；反应 后酶会混在产物中，可能影响产 品质量 固定化 酶既能与反应物接触， 一种酶只能催化一种化学反应， 酶 又能与产物分离，同 而在生产实践中，很多产物的形 时，固定在载体上的 成都通过一系列的酶促反应才能 酶还可以被反复利用 得到的 固定化 成本低、操作容易、 固定后的酶或细胞与反应物不容 细胞 对酶活性的影响更小、 易接近，可能导致反应效果下降 可以催化一系列的反 由于大分子物质难以自由通过细 应、容易回收 胞膜，因此固定化细胞的应用也 受到限制 ②生产优点 反应柱能连续使用半年，大大降低了生产 成本，提高了果糖的产量和质量 （五）酶和细胞固定化方法 将酶吸附到固体吸附剂表面的 1 、物理吸附法： 方法，固体吸附剂多为活性碳、 多孔玻璃等 2 、包埋法 ①定义： 将酶包裹在多孔的载体中，包埋成 格子型或包埋成微胶囊型 ②载体：明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤 维素和聚丙烯酰胺 3 、化学结合法： ①定义： 将酶分子相互结合，或将其结合到 纤维素、琼脂糖，离子交换树脂等载体上的 固定方式 （六）酶和细胞固定方法的选择 1 、方法 ①酶适合采用化学结合和物理吸附法固定 ②细胞适合采用包埋法固定 2 、原因 ①细胞个大，酶分子很小 ②个体大的细胞难以被吸附或结合而个小的 酶容易从包埋的材料中漏出 二、实验操作 （一）方法 1 、包埋法固定化细胞 2 、海藻酸钠作载体包埋酵母细胞 （二）制备固定化酵母细胞 1 、酵母细胞的活化 ① 过程 称取 1g 干酵母，放入 50ml 的小烧杯中，加 入蒸馏水 10ml 。用玻璃棒搅拌，使酵母细胞 混合均匀，成糊状，放置 1h 左右，使其活化 ②注意事项 A 、选用的干酵母要具有较强的活性，而且 物种单一 B 、在缺水状态下，微生物处于休眠状态。 活化就是让处于 ( ) 的微生物重新恢 休眠状态 复正常的生活状态 2 、配置物质的量浓度为 0.05mol/L 的 CaCl 2 溶液 ① 过程 称取无水 CaCl 2 0.83g ，放入 200ml 的烧杯 中，加入 150ml 的蒸馏水，使其充分溶解， 待用 ②注意事项 溶解物质要彻底，勿用自来水溶解，以防 自来水中各种离子影响实验结果 3 、配制海藻酸钠溶液 ① 过程 称取 0.7g 海藻酸钠，放入 50ml 小烧杯中，加入 10ml 水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海 藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容 至 10ml ②注意事项 小火 间断加热 加热时要用 ，或者 反复几次，直 到海藻酸钠溶化为止 海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如 果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如 果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞 的数目少 4 、海藻酸钠溶液和酵母细胞混合 ① 过程 将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入 以活化的酵母细胞，进行充分搅