外源基因在原核细胞中表达汇编.pptVIP

基因工程原理纲要 第一讲基因工程概论属实 第二讲基因工程的主要技术 第三讲基因工程的酶学基础 第四讲基因克隆的载体与受体 第五讲目的基因的克隆与分离 第六讲克隆基因的检测与鉴定 第七讲克隆基因的表达与产物纯化 第八讲基因表达的调控  第七讲基因的表达、调节与产物纯化  第一节外源基因在原核细胞中的表达  原核生物基因表达的特点 1只有一种RNA多聚酶 识别原核细胞的启动子,催化所有的RNA合成。 以操纵子为单位 数个相关的结构基因与其调控区结合形成一个表达 的协同单位  3.转录和翻译偶联、连续进行。 53 有意义链 反意义链 5 ↓转录 mRNA 3 翻译 N 蛋白质c  DNA 氨基酸 tRNA/Q mRI 氨基酸→ tRMA肽链 mRNA 核糖体  4不含内含子,缺乏转录后的加工系统。 5调控主要在转录水平上。 6mNA的核糖体结合位点。 Shine-Dalgarno ( SD) sequence 含有一个启始密码子和一段同核糖体16SRNA3 末端碱基互补的序列,叫 Shine-Dalgarno(SD) 序列。  原核表达系统的注意事项 外源基因不能带有内含子 2必须用DNA 3.不能直接用真核基因组DNA 4.必须利用原核细胞的调控原件(启动子等) 5。防止外源基因产物对宿主