microRNA检测技术在临床的应用.ppt

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第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 (一) miRNA概念 miRNA是一类进化上保守的单链非编码小分子RNA,定位于RNA前体的3‘端或5’端,具有在翻译水平调控基因表达的功能。 第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 (二)miRNA基本特征 1.结构特征 2. miRNA的存在形式 3. 保守性 4.时空特异性 第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 (三)不同生物的miRNA特点 植物与动物miRNA的区别 第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 (四)miRNA与siRNA的比较 1.miRNA与siRNA相同之处 (1)二者的长度都约在22nt左右。 (2)二者都依赖Dicer酶的加工,是Dicer的产物,所以具有Dicer产物的特点: 5'端磷酸,3'端均有2个游离核苷酸。 (3)miRNA和siRNA合成都是由双链的RNA或RNA前体形成的。 (4)二者都是RNA诱导的基因沉默复合体 (RNA induced silencing complex,RISC)组分,都具有组成RISC复合体的Argonaute蛋白家族,其功能界限已变得不清晰,如二者在介导沉默机制上有重叠。 第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 (四)miRNA与siRNA的比较 2.miRNA和siRNA区别: (1)根本区别是miRNA是内源的,在基因组中有固定的基因座位;siRNA可以是人工体外合成的,也可以是基因组的转录片断,降解片断和转座片断,病毒基因组转录片断等,。 (2)二者结构上没有本质区别,功能分子都是单链RNA,miRNA转录出来时必然是发夹状的,siRNA可以由完全互补的双链切断而来,也可以从发夹来。 (3)本质区别在于作用位点上,miRNA作用于固定的靶基因,有特定的作用位点,一般在靶基因3′-UTR区,而siRNA由于是随机产生的或者人工设计的,因此作用位点可以设计或改变,可作用于mRNA的任何部位。 (4)在作用方式上,没有本质区别,是否降解或翻译抑制取决于互补程度,siRNA也可抑制靶标基因的翻译。 (5)miRNA的生理功能在于调控发育分化和调亡,适时调节内源基因表达,而siRNA是生物抵抗外来核酸片断入侵的一种方式,原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 (一)miRNA生物合成 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 (一)miRNA生物合成 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 (一)miRNA生物合成 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 (二)miRNA 生物学功能 1.miRNA调控基因表达机制 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 (二)miRNA 生物学功能 2 .miRNA调控基因表达的特征与优点 (1) miRNA调控基因表达的特点 1)交叉调节 ; 2)自我调节; 3)可逆性调节. (2) miRNA调控基因表达的优点 1)与蛋白水平的调节相比,更加节省能量 2) 与转录水平调节相比, miRNA 调节更迅速,而且是可逆的 3)内含子所编码的 miRNA 是一种对基因组资源的高效利用 第一节 概述 三.miRNA应用 (一)基因功能的分析 (二) miRNA 功能和效应的评价 (三) 新型基因治疗方案的设计和发展 (四)抗病毒疫苗的设计和研制 (五)功能缺失转基因动物的建立 第二节 miRNA检测与定量方法 一、理想的miRNA检测与定量方法miRNA检测 1.具有足够的灵敏性检测到少量的miRNA; 2.具有足够的特异性足以分辨一个碱基差异的 miRNA; 3.能够进行miRNA表达的定量分析; 4.进行多样本平行检测;检测过程简便、经济。 第二节 miRNA检测与定量方法 二、几种常用miRNA检测与定量的方法 (一)基因芯片技术 miRNA microarray可以检测组织特异的miRNA,并且实验结果可重复率高。这种微芯片不仅可以检测miRNA的类型,还可以对其进行定量。它可以一次在同一样本中检测出几百个基因的全部表达;通过设计适当的寡核苷酸探针,同时检测成熟的miRNA及其前体分子; miRNA microarray可以用于高通量的筛选miRNA,并且可以用于临床病例的筛选。 第二节 miRNA检测与定量方法 二、几种常用miRNA检测与定量的方法 (一)基因芯片

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