血红蛋白的提取和分离(完美修改).pdfVIP

专题五 课题 3 血红蛋白的提取和分离 学习目标 1、理解凝胶色谱法、 电泳法的基本原理，了解缓冲液的组成及其作 用； 2、掌握血红蛋白的提取与分离的基本过程和方法。 一．基础知识 蛋白质的物化理性质： ，由此 提取和分离各种蛋白质。 1．凝胶色谱法（分配色谱法）： （1）概念：根据被分离蛋白质的 ，利用具有网 状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。 （2）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的 间隙，路程短，流动 快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 （3）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （4）分离过程：（ 图5 －13b） 混合物上柱 → → 分子流 动快、 分子流动慢→收集 分子→收集 分子 （洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流 动。） 2.缓冲溶液 （1）作用：能够抵制 的对溶液的 的影响，维持 PH 基本不变。 （2）缓冲溶液的配制：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如 H CO － 2 3 1 NaHCO ；NaH PO4/Na HPO 等）。通常由 种缓冲剂溶解 3 2 2 4 于水中配制而成。 3.凝胶 电泳法： （1）原理：不同蛋白质的 不同，在 电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同， 致不同蛋白质在 电场中的 运动方向和运动速度不同。 （ 2） 分 离 方 法： 、 。 （3）分离过程：在一定 pH 下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带 负电荷多的_______ ，形成“蛋白质－SDS 复合物”，使蛋白质迁移速率仅 ___________________ 。 二．实验设计 1.蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤 ？ 、 、 、 。 2.选择实验材料 （1）你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红 蛋白？为什么？ _____________ 。 ___________________________________________________ 。 （2）请阅读教材，认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。并思考回 答下列问题： 2 血液由 和 两部分组成。血细胞中 细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是 。该化合物是由 和 构成的，其中每个亚基中都含有一个能与 O 和 CO 结合