血清总蛋白测定(双缩脲试剂法).pdfVIP

生物化学实验报告 姓 名： 学 号： 专业年级： 组 别： 生物化学与分子生物学实验教学中心 实 验 血清总蛋白测定（双缩脲试剂法） 名称 实 验 实验地 2014-11-21 第五实验室 日期 点 合 作 指导老 者 师 教 师 批 改 评分 签名 日期 一、实验目的 1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作； 2、熟悉血清总蛋白的临床意义； 3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。 二、实验原理 （一）：双缩脲反应 在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC －NH －CONH2)能与 Cu2+作用,形成紫 色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。两分子尿素加热脱氨缩合 成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性 溶液中可与 Cu2+发生双缩脲反应 ，生成紫红色络合物 ；蛋白 分子含有大 量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条件下与 Cu2+发生双缩脲反 应，生成的紫红色络合物，且在 540nm 处的吸光度与蛋白 的含量在 10～ 120g/L 范围内有良好的线性关系。 三、材料与方法： 实验材料 样品：大牛血清 试剂：双缩脲试剂、蛋白质标准液（70g/L）、生理盐水（0.9%） 器材：试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球 设备：1100 分光光度计、水浴锅 实验步骤 取 3 支试管，做好标记(B 空白对照，S 标准液，U 为待测大牛血清)，按 下表操作： 加入物（ml） B (空白） S （标准） U （待测） 大牛血清（1 ： - - 0.5 10） 蛋白标准液 - 0.5 - （1 ：10） 0.9%氯化钠 0.5 - - 溶液 双缩脲试剂 4.0 4.0 4.0 a.各管混匀，观察各试管颜色 b.将各试管置于 37℃水浴锅中加热 20min，观察颜色 c.将试管中的液体倒入比色杯中，置于 1100 分光光度计的样品槽内，在 波长 540nm，以空白管调零，测 S 和 U 管吸的光度。 d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管 依据公式算出结果 四、结果与讨论 ： （一）：实验结果 1、实验现象： a、在实验中首先加入双缩脲试剂，再依次加入 0.9%氯化钠溶液、蛋白 质标准液、相应的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化，呈淡蓝色透明状； b 、水浴 20 分钟之后，B 试管试管显淡蓝色；S 试管和 U 试管显浅紫色且 S 试管的颜色比 U 试管的颜色稍深。 2、实验数据： 管 号