血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定-实验报告.pdfVIP

生物化学实验报告 姓 名： 学 号： 专业年级： 组 别： 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验 名称 (Title 血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定 of Experime tn) 实验 实验地 日期 (Lab No.) (Date 2013-12-11 of Experime nt) 合作 指导老 者 师 (Partner) (Instructor) 总分 教师 批改日 (Tota 签名 期 l Score) (Signature (Date) ) 【实验报告第一部分（预习报告内容） ：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、 主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）； 评分（满分 30 分）：XX 】 实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法 2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法 3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法 4、掌握醋酸纤 素薄膜 电泳法的原理和基本方法 5、了解柱层析技术 实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手 段。 2、 不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用 这些性质的差别，可分离纯化各种蛋白质。 3、 盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或 达饱和状态，可使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质 溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致 使蛋白质分子周 围的水化膜减弱乃至消失。中性盐加入蛋白质溶液 后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的 电荷大量被中和，更加导致 蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。 4、 离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上 的离子进行可逆的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分 离。 5、 醋酸纤 素薄膜 电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同， 一般都低于 pH7.4 。它们在 pH8.6 的缓冲液中均解离带负电荷，在 电 场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电 荷量不同，因而在醋酸纤 素薄膜上 电泳的速度也不同。因此可以将 它们分离为清蛋白（Albumin) 、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球 蛋白 5 条区带。 实验材料：人混合血清 葡聚糖凝胶（G-25)层析柱 DEAE 纤 离子交换层析柱 饱和硫酸铵溶液 醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸 1%BaCl 溶液