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克氏原螯虾一种新型crustin 抗细菌机制的初步研究
目录
摘要i
Abstractii
缩略语表 （Abbreviation）iv
1文献综述1
1.1无脊椎动物先天免疫系统2
1.1.1物理防御2
1.1.2细胞免疫3
1.1.3体液免疫4
1.2抗菌肽研究概况6
1.2.1抗菌肽的来源6
1.2.2抗菌肽的结构8
1.2.3抗菌肽的功能9
1.2.4抗菌肽的抑菌机制9
1.3 甲壳动物中抗菌肽的研究进展12
1.3.1对虾素 （Panaeidin）12
1.3.2抗脂多糖因子 （ALF）13
1.3.3 溶菌酶 （Lysozyme）13
1.4 甲壳素 （Crustin）研究进展14
1.4.1Crustin 的结构15
1.4.2 Crustin 的类型15
1.4.3 Crustin 的表达模式16
1.4.4 Crustin 的功能特性17
1.5本研究的目的与意义17
2 材料与方法18
2.1实验材料18
2.2试验方法21
3 结果与分析28
3.1Pc-CruL 原核表达质粒的构建28
I
华中农业大学2020 届硕士研究生学位 （毕业）论文
3.2Pc-CruL序列比对分析及进化树构建29
3.3 Pc-CruL 的组织分布31
3.4Pc-CruL表达模式31
3.5Pc-CruL 的重组表达和蛋白检测34
3.6Pc-CruL体外抑菌试验35
3.7Pc-CruL细菌结合实验38
3.8Pc-CruL对小龙虾存活率的影响39
4讨论与结论40
参考文献43
附录59
致谢60
II
克氏原螯虾一种新型crustin 抗细菌机制的初步研究
摘要
克氏原螯虾 （Procambarus clarkii）简称小龙虾，是我国重要的经济虾类，
广泛分布于我国东南部和中部地区。近年来，随着人们需求的不断上升，养殖业
的不断发展，养殖过程中的病害也不断爆发，包括细菌病、病毒病等，给克氏原
螯虾养殖业带来了巨大的经济损失。克氏原螯虾作为无脊椎动物缺乏适应性免疫
系统，主要通过先天免疫系统来对抗病原体的入侵。抗菌肽 （Antimicrobial
peptide，AMP）作为无脊椎动物先天免疫系统中的重要效应分子，因其具有广
谱的抗菌活性和不易产生耐药性等优点使其成为传统抗生素的替代者之一。甲壳
素 （Crustin）是目前克氏原螯虾中研究比较广泛的一类抗菌肽，本研究扩增鉴定
了来自克氏原螯虾中的一种新型Crustin，命名为Pc-CruL （Procambarus clarkii
crustin L）。为揭示Pc-CruL 在克氏原螯虾中的功能，利用体外重组表达的方式，
确定了其抗菌活性。以期从天然免疫的角度揭示其与病原体的关系，并为克氏原
螯虾养殖病害的防控和药物的开放发提供一定的科学依据。主要内容如下：
在克氏原螯虾中扩增Pc-CruL 基因，将该基因连接至pGEX-4T-
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