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组织培养方案
组员：
一、实验目的：
1）认识和掌握红豆杉愈伤组织培养的原理、方法和过程；
2）锻炼学生的自主实验能力和检验学习效果。
一、实验原理：
南方红豆杉是中国特有珍贵树种,集药用、材用与观赏等多种价值于一体
南方红豆杉(Taxus chinensis var. mairei)为裸子植物亚门(Cymmospermai)松杉纲(Coniferopside)红豆杉目(Taxales) 红豆杉科(Taxaceae S.F.Gery) 红豆杉属(Taxus Linn.)植物,为中国特有的白垩纪孑遗植物和国家一级保护植物。南方红豆杉材质细密,木心红色,坚韧耐用,是珍贵的红木树种;其树形挺拔优美,四季常青,秋冬时节红果满枝,是重要的观赏物种;其树皮、枝、叶、根中均含有抗癌活性成分——紫杉醇,更是珍稀的药用植物。
根据文献查得外植体诱导愈伤组织的容易程度为幼嫩茎段>幼叶>花蕾。
二、实验材料：
1）MS固体培养基（1L）、6-BA（0.5mg/L ）、2,4-D（1.0mg/L ）、75%酒精、升汞、无菌水、红豆杉的嫩芽或幼叶等；
2）小锥形瓶（30）、牛皮纸、皮筋、陶瓷杯、培养皿、烧杯各若干、移液枪、移液管、移液枪头、接种工具盒（含镊子、手术刀）、超净工作台等。
三、实验步骤
1）选择生长健壮、无病虫害的幼嫩茎段作外植体，用自来水冲洗15min ；同时配制含有激素的MS固体培养基（MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.0mg/L）；调节PH至5.6左右；
2）将培养基倒入到锥形瓶里，每瓶大概30ml；将接种工具盒、烧杯、锥形瓶 （含培养基）、吸水纸、培养皿等放入灭菌锅中灭菌20min；
3）待灭菌完毕，冷却后取出，放入超净工作台紫外灭菌；灭菌完毕后，将实验材料纳入工作台，开始准备接种；
4）在无菌条件下用75% 酒精消毒30s，再用0.1 % 升汞消毒10min ,无菌水冲洗5次，然后将材料切成0.5cm长的小段供接种用；两人接种，一人处理，一人接入锥形瓶中
5）将接种后的材料放到培养室培养，每隔一周观察是否出现愈伤组织和污染情况；根据结果决定是否继代和诱导培养。
附：
6）以MS为基本培养基.南方红豆杉愈伤组织继代培养的培养基配方:MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.0mg/L，继代5次就进入诱导生芽阶段；
7）以1/2MS为基本培养基使用ZT0.1mg/L进行诱导生芽，生根培养阶段，以附加NAA 1.0mg/L+0.1%活性炭的1/2MS培养基，所有培养基中皆含蔗糖3%，琼脂0.7%，pH5.6
参考文献：
[1]叶添谋,王羽梅.南方红豆杉组织培养育苗实验[J].福建林业科技,2008,35(3):102-105.
[2]李丽,何康.两种红豆杉植物的愈伤组织培养及褐化抑制[J].复旦学报,2006,45（6）.
[3]梁珍海, 刘根林, 徐 锋.红豆杉属植物组织培养及其快速繁殖研究综述[J].江苏林业科技,2001,28(3).
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