探讨IL-37对单核巨噬细胞的泡沫化的作用及机制-病理学论文-基础医学论文-医学论文.docx 14页

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  • 2021-01-14 发布

探讨IL-37对单核巨噬细胞的泡沫化的作用及机制-病理学论文-基础医学论文-医学论文.docx

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    探讨IL-37对单核巨噬细胞的泡沫化的作用及机制-病理学论文-基础医学论文-医学论文 ——文章均为WORD文档,下载后可直接编辑使用亦可打印——   动脉粥样硬化(AS)是一种累及全身血管的慢 性病变。AS不仅仅是脂质代谢紊乱,同时也是一种慢性炎症性疾病,多种免疫细胞及细胞因子参与了其发生与进展。单核细胞迁移到内皮下转化为具有吞噬作用的巨噬细胞,通过清道夫受体(scav-enger receptor,SR)吞噬脂质形成泡沫细胞,释放一系列炎性因子及趋化蛋白,启动炎症级联反应,促进AS进展。此外,泡沫细胞沉积于内皮下,导致内膜进一步改变。白细胞介素(IL)被认为是调节AS进展中泡沫细胞形成的关键因素。   IL-37能够抑制多种炎性因子的表达,平衡体内促炎因子与抑炎因子,抑制树突状细胞的活化,减轻炎症 反应。有实验在AS组织泡沫细胞中检测到IL-37蛋白表达,但其能否影响单核巨噬细胞的泡沫化尚未明确。本研究以人单核细胞系THP-1为对象,体外模拟巨噬细胞泡沫化的过程,观察IL-37的作用,并对可能机制进行探讨。   1材料与方法   1.1材料   THP-1细胞系购自美国ATCC公 司,RPMI1640及胎牛血清购 自Gibic公 司,ox-LDL购 自Yiyuan Biotechnologies公司,小鼠抗人ABCA-1单克隆抗体(sc-58219)购自美国SANTA CRUZ公司,-Actin(sc-47778)购自美国SANTA CRUZ公司,兔抗人CD36单克隆抗体购自美国EPITOMICS公司,小鼠 抗 人SR-A单克隆抗体购自美国R&D公 司,Trizol及RT-PCR试 剂 盒 购 自 日 本Takara公 司,CD36引物、SRA引物、ABCA-1引物、GAPDH引物由中国武汉擎科生物公司设计合成。   1.2方法   1.2.1 THP-1细胞培养THP-1细胞为悬浮生长细胞,用含10%FBS的RPMI1640培养基,培养基加入青霉素(100U/ml)和链霉素(100g/ml),37℃、5% CO2培养箱中静置培养,每2~3d传代1次。   1.2.2巨噬细胞的分化1 000g、5min离心上述培养的THP-1细胞,弃上清,按1106/ml重悬于新的培养基中,接种到6孔板或者细胞培养瓶中,加入PMA(终浓度为160nmol/L),37℃、5%CO2培养箱中静置培养24h,观察细胞贴壁和形态改变。   1.2.3分组及建立泡沫细胞模型THP-1细胞(1106/ml)在160nmol/L PMA刺激24h分化为巨噬细胞,然后分别给予ox-LDL(50mg/ml)、ox-LDL(50 mg/ml)+IL-37(5ng/ml)、ox-LDL(50mg/ml)+IL-37(10ng/ml)、ox-LDL(50mg/ml)+IL-37(20ng/ml)。各组细胞均置5% CO2、37℃孵箱,培养24h。其中仅给予ox-LDL(50mg/ml)单独刺激的对照组再进行进一步分组实验,一组给予IL-37(10ng/ml),另一组仅更换新鲜培养基,24h后收集细胞。   1.2.4油红O染色观察泡沫细胞形态将THP-1培养于放有盖玻片的6孔培养板内,用PMA刺激24h后,加入ox-LDL和(或)IL-37干预24h。待处理结束后,弃上清,用预冷PBS液冲洗3次。4%多聚甲醛固定2~4min,0.3%油红O染色液染色15~20min,苏木素染色5min,盐酸酒精分色,明胶甘油封片,显微镜观察。收集图像并用图像分析系统分析。   1.2.5细胞内脂质测定弃干预后的细胞培养液,用预冷PBS冲洗3次,冰浴30min,用细胞刮刮下细胞,800g离心10min,加入0.5ml的氯仿-甲醇(2∶1)混合液研磨,3 000g、4℃离心30min,取上清液,加两倍体积的冰生理盐水,3 000g离心30min,去除上层液体,将下层有机相转移到干燥的EP管,用TC试 剂 盒 测 定TC,沉 淀 用0.1mmol/L NaOH 0.2ml溶解,BCA法测细胞内蛋白质含量。细胞内胆固醇含量用每克蛋白所含的TC表示。   1.2.6 RT-PCR检测RNA提取上述干预后的细胞,用预冷PBS冲洗3次,每孔加入1ml Trizol,静置10 min,用枪吹打 数次,吸入无RNA酶 的1.5ml EP管中,每管加入200l氯仿,震荡数秒,室温静置10min,12 000g、15min,4℃,离心;吸取上层液体层200~300l到另一EP管中,等体积加入预冷的异丙醇,轻轻混匀,-20℃,放置10min,12 000g、15min,4℃离心;弃上清,加入1ml预冷无水乙醇,7 500g、10min,4℃,离心;尽最大

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    • 内容提供方:天降财神
    • 审核时间:2021-01-14
    • 审核编号:8100056126003036

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