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活性氧在酿酒酵母乙醇胁 迫中的作用 摘要 酿酒酵母是一种传统的乙醇生产微生物，通常用于乙醇燃料生产和酿造业，但 过量的乙醇会抑制细胞的生长和活性，对酵母细胞产生毒害作用。ROS （ReactiveOxygenSpecies ）是一类性质活泼的小分子化合物，在多种逆境胁迫中 期起重要作用，但是否在乙醇胁迫中起重要作用尚无定论。 为了解ROS在乙醇胁迫中的作用及机制，本文以酿酒酵母为材料，检测了乙醇 胁迫对酵母细胞超氧阴离子（O2·-）含量、过氧化氢（H O ）含量、酵母细胞生长状 2 2 况、膜完整性、线粒体膜电位以及脂质和蛋白质损伤的影响。 实验结果表明，乙醇可以抑制对数生长期酵母的生长，导致膜完整性受损、 ·- 线粒体膜电位降低、O 和 H O 水平增加、脂质过氧化物 MDA 含量增加。加入外源 2 2 2 还原型谷胱甘肽（GSH ），蛋氨酸（Met ），N-acetylcysteine （N-乙酰半胱氨酸， ·- NAC ）后，可以提高酿酒酵母细胞存活率及膜完整性，线粒体膜电位、降低O 和 H O 2 2 2 水平。添加GSH ，Met ，NAC 到发酵培养基中，检测发酵后乙醇含量发现，正常组为 7.3% ，Met ，NAC 可以将乙醇产率分别提高到 8.62%和 8.56% ，而GSH 只有 6.35% 。 ·- 以上结果表明乙醇能够诱导O 和 H O 等 ROS 的产生，导致氧化胁迫，从而造成酵 2 2 2 母细胞发生膜质过氧化，生长受到抑制。而 GSH ，Met ，NAC 可以清除过量的ROS ， 降低乙醇胁迫引起的酵母损伤，其中Met 和 NAC 虽然可以提高乙醇产率，但是只有 NAC 处理在统计学上具有差异性。 为进一步研究 ROS 变化的机制，采用自噬抑制剂3-MA 和自噬诱导剂雷帕霉素 ·- (rapamycin)处理乙醇胁迫条件下的酵母细胞，检测对 O 和 H O 水平，菌落形态 2 2 2 ·- 以及膜完整性的影响。结果表明，3MA 可以有效降低 O 和 H O 水平，降低乙醇对 2 2 2 酵母菌落的抑制，提高膜完整性，而雷帕霉素进一步加剧对菌落的抑制，降低膜完 ·- 整性，提高 O 和 H O 水平。表明自噬是影响 ROS 水平的机制之一，它通过调节 ROS 2 2 2 参与酿酒酵母乙醇胁迫损伤。 关键词 ：酿酒酵母；乙醇胁迫；自噬；ROS II Abstract Saccharomycescerevisiaeisastrainusedtoproduceethanolandisappliedinthepr oductionofethanolfuelandbrewingindustry.Saccharomycescerevisiaeisatrand itionalyieldethanolstrain,butissensitivetothehighconcentofethano