尿液标本细菌检验.pptVIP

尿液标本的细菌学检验 一、标本采集 意义：尿液细菌培养是泌尿系感染的诊断依据。 采集时间：取晨起第一次尿，应在用药之前； 标本采集注意事项：严格无菌操作，防止污染，正确留取尿液是细菌培养的关键；尽快送检，不加防腐剂或消毒剂。 采集方法： 1.导尿法 取10-15ml置入无菌容器中送检，用于无法排尿或已插导尿管的患者。 2.中段尿采集法：简单易行，无感染危险 女性：先用肥皂水与灭菌水洗净外阴及尿道口 男性：应翻转包皮，肥皂水洗净，再用清水冲洗尿道口 让患者排尿，收集成直线排出的中段尿10-20ml,于无菌瓶内送检。 3.肾盂尿采集法：由泌尿科医生进行 4.膀胱穿刺采集法：适用于厌氧菌培养 消毒患者耻骨上皮肤后，无菌注射器作膀胱穿刺，取尿（厌氧培养时应将针头插入橡皮塞内）送检。 5.集尿法: 适宜于结核杆菌检查，用一清洁容器收集24小时尿，取沉渣送检。 二、检验方法 检验程序：见表 尿 液 直接/离心沉淀涂片染色镜检 定量培养菌落计数 离心沉淀分离培养 直接药敏 报 告 （一级报告） 普通细菌培养 特殊培养 （BA、MAC、EMB） （选择培养基) 报 告 （二级报告） 观察菌落 分离鉴定 （最终报告） 涂片染色镜检 纯培养 鉴定试验 药敏试验 最终报告（三级报告） （一）涂片镜检 一般细菌检查： 取新鲜尿液1滴，涂片革兰染色，油镜观察细菌数，如每个视野≥1个细菌，则相当于细菌定量培养≥105 CPU/ml。 取尿液10-15ml,3000r/min离心15min,取沉渣涂片染色镜检，据形态、排列及染色，得出初步印象，报告找到--排列，疑似--菌。 淋球菌检查 取早晨第一次尿，10-15ml,离心沉淀，取沉渣染色镜检，据形态染色性（细胞内或细胞外），可作初步报告。 结核杆菌检查 取尿离心沉淀，涂片作抗酸染色或荧光染色。 假丝酵母菌检查 取离心沉淀物置载玻片上，盖上载玻片，镜下直接观察，也可革兰染色，见有发亮的卵圆形芽生孢子和管状假菌丝，或为革兰阳性酵母样细胞时，即可报告“找到酵母样菌，形似假丝酵母菌”。 钩端螺旋体检查 取发病一周后患者（先口服NaHCO2，降低尿的酸度）的尿液5-10ml，3000r/min离心30min,取沉淀物置玻片上，加盖玻片后放暗视野显微镜检查，找到钩体，报告“暗视野显镜检找到钩端螺旋体”。 （二）分离培养 1.一般细菌培养 取尿液离心沉淀物分别种于BA、MAC、EMB等培养基，35℃培养18-24小时; 若2种培养基上均有革兰阴性细菌生长，不分解乳糖，按沙门菌、变形杆菌进行鉴定； 如果分解乳糖，则按大肠埃希菌、产气杆菌、肺炎克雷伯菌等鉴别； 只能在血平板生长者，应根据涂片染色、做出最后鉴定，再报告。 2、淋病奈瑟菌培养 取沉淀物接种35℃预温的 CA (加万古霉素、多粘菌素、制霉菌素)，置35℃含5-10%的CO2条件下培养24小时，如不长，则继续到48小时，若有可以菌落，则按淋球菌鉴定报告。 尿中抗生素浓度高，易使细菌形成L-型，故常规方法培养阴性时，应考虑进行L-型菌培养。 (三)定量培养 要求：尿液新鲜、冷冻保存不得超过2小时，不能离心 1.倾注平板法 取新鲜尿液混匀，用无菌生理盐水进行1:10,1:100；1:1000等稀释，各取1ml,分别加入直径9cm的无菌平皿内，然后倾注融化冰冷却至45℃-50℃的普通营养琼脂，并立即混匀，带凝固后，放35℃培养24-48小时，做菌落计数，计算每1ml中细菌数 每ml尿液细菌数＝菌落平均数×尿液稀释倍数 2.平板接种法 用定量移液器取尿5ul,滴注在琼脂平板上，用接种环或L型玻棒均匀涂抹，待表面干燥后，35 ℃培养，18-24小时，计数菌落，乘以200，即得每ml尿液中细菌数。 3.定量接种法 用定量接种环（1ul或10ul）醮满尿液，在血平板上均匀划线接种，置35℃培养，18-24小时，计数菌落，乘以1000或100，即得每ml尿液的菌落数。 报告： 当细菌超过10万或生长过多不可计数时，报告 “菌落计数，每毫升尿液含菌数＞105个”（cfu/ml）; 当细菌数＜105个时，则报告实际菌数；若无菌生长则报告 “培养48小时无菌生长”。 三、临床意义 正常膀胱是无菌的。 尿液排出受尿路细菌污染，但中段尿培养，细菌数不会超过103 CFU/ml; 当泌尿系感染时，尿中细菌数可达到104-105 CFU/ml；若细菌数≥105 CFU/ml可作为泌尿系细菌感染的细菌学标准。 但如果低于上述标准，也不能完全排出尿路感染的可能。 尿液标本中常见的病原菌及正常菌群 病原菌 革兰阳性菌：金葡、化脓性链