4.革兰氏阴性球菌的分类鉴定（2013年09级检验系）.ppt

革兰氏阴性球菌的分类鉴定 河南省卫生厅临床检验中心 金雨琦 在临床微生物学中，需氧生长的革兰氏阴性球菌只有一个科，即奈瑟氏菌科。 奈瑟氏菌科包括5个属，即：奈瑟氏菌属、布兰汉氏菌属、莫拉氏菌属、不动杆菌属和金氏杆菌属。 奈瑟氏菌属与布兰汉氏菌属之间，在菌体的形态、大小、排列方式、染色反应等方面基本上是一样的； 在血琼脂和巧克力色血琼脂上的菌落形态基本相同； 在生化反应方面，两菌之间亦极为相似。 但从人体能够分离出的布兰汉氏菌属只有一个种，即卡它尔布兰汉氏菌，它与奈瑟氏菌属的主要区别点就在于卡它尔布兰汉氏菌DNA酶阳性；而奈瑟氏菌属的所有种，DNA酶均为阴性。据此，可资鉴别。 一、卡它尔布兰汉氏菌 本菌的归属和命名曾几度被更改。最初被称为卡它尔微球菌；上个世纪60年代被命名为卡它尔奈瑟氏菌；70年代根据DNA同源性的研究，被独立分为一属，即布兰汉氏菌属。79年后国际微生物学界部分学者建议将本菌划归于莫拉氏菌，成为卡它尔莫拉氏菌。近年来，国际上一些权威微生物学著作如《伯杰氏细菌鉴定手册》第九版将其归属于莫拉氏菌属布兰汉氏亚属，但习惯上仍将其称为布兰汉氏菌属。 该属只有一个种：卡它尔布兰汉氏菌。 卡它尔布兰汉氏菌为革兰氏阴性小球菌，无鞭毛，不运动，单个或成双排列，相邻面稍平坦。 该菌在血琼脂和巧克力平板上生长良好，菌落呈灰白色，不透明、圆形、突起、表面干燥。5～10%的CO2环境有助于该菌的生长。 本菌对低温的耐受性比其它奈瑟氏菌属细菌强，能在28℃以下生长。 触酶及氧化酶阳性,DNA酶阳性。 卡它尔布兰汉氏菌是人类和其它温血脊椎动物上呼吸道粘膜的正常菌群之一，在幼年和老年人群中多见，而健康成人中少见。近十年来的临床观察和研究证实，本菌是导致10～15%中耳炎、鼻窦炎病例的病原菌，且常引起老年病人的下呼吸道感染，尤其常见于慢性肺气肿和肺心病患者，临床实验室在处理这类病人的呼吸道标本时，应重视本菌的分离和鉴定。 二、奈瑟氏菌属（Neisseria）的分类鉴定 （一）、奈瑟氏菌属的主要特性： 奈瑟氏菌属是一群革兰氏阴性球菌，菌体呈肾形，通常成双排列，即凹面相对、突面相背，宛如螺丝帽状。该菌属无鞭毛、无芽孢，具有严格的寄生性。除淋病奈瑟氏菌存在于患者的泌尿生殖道粘膜外，其它常寄生于人的鼻咽腔。 该菌属中的致病菌营养要求较高，在普通培养基上不生长或生长极为不良，在含血液或血清的培养基上生长良好；对环境温度和生长条件要求也较高：低于30℃，高于40℃即不能生长；初次分离需提供5～10%的CO2环境才能生长。 该菌属细菌特别是病原菌发酵糖类的能力较弱，氧化酶、触酶均为阳性，DNA酶阴性，此为该菌属的共同特性。 （二）、奈瑟氏菌属的分类： 根据目前的分类，国际上公开承认的奈瑟氏菌属共有十个种，即：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、解（嗜）乳糖奈瑟氏菌、灰色奈瑟氏菌、多糖奈瑟氏菌、微黄奈瑟氏菌、干燥奈瑟氏菌、粘液奈瑟氏菌、浅（变）黄奈瑟氏菌、延长奈瑟氏菌。 （三）、? 脑膜炎奈瑟氏菌（N. Meningitidis） 脑膜炎奈瑟氏菌（俗称脑膜炎球菌）是流行性脑脊髓膜炎（流脑）的病原菌。人类是该菌的唯一宿主。 该菌系1884年由马契法伐（Marchiafave）与西利（Celli）两氏于脑脊髓膜炎患者之脑膜渗出液中首先发现，后于1887年由威希塞巴姆（Weichselbaum）氏于六例脑脊髓膜炎患者之脑脊液中分离获得此菌之纯培养。 1、 生物学性状 （1）、形态与染色： 脑膜炎奈瑟氏菌为革兰氏阴性双球菌。单个菌体呈肾形，凹面相对、突面相背、成双排列，宛如螺丝帽状。该菌无鞭毛、无芽孢，部分菌株可形成荚膜。该菌幼龄菌菌体形态圆整，衰老菌易呈多形性。在脑脊液涂片中，本菌常位于中性粒细胞内外，形态典型，对流脑具有诊断意义；经人工培养的细菌，形态多呈卵圆形或球形，排列不规则、菌体大小不等。如培养过久，培养物涂片所见细菌常呈衰退或膨大的球状，着色不均匀，这与细菌本身的自溶酶有关。 （2）、培养特性 脑膜炎奈瑟氏菌为专性需氧菌，初次分离时需5～10%的CO2环境才能生长，这是因为该菌在生长过程中能分解培养基中的某些含氮物质产生氨，氨对该菌有杀灭作用，而CO2能中和细菌所产生的氨，以减少对细菌的毒性。故初次分离需提供CO2环境。 该菌娇弱易死，对温度要求很严，低于30℃，高于40℃即不能生长，其最适生长温度为35～37℃；最适pH为7.4～7.6。 脑膜炎奈瑟氏菌对营养要求较高，在普通培养基上不能生长，需在含有血液、血清或卵黄的培养基中才能生长。这是因为该菌对蛋白胨和琼脂中所含的毒性酸类和微量金属敏感，这种抑制物可通过加入的血液、血清与之结合而被除去，也可将培养基中加入适量玉米粉、山芋粉等不溶性淀粉将毒性物质吸附掉。 临床上常用巧