elisa的检测原理及步骤.pptxVIP

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2021-01-19 发布于广东
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elisa的检测原理及步骤.pptx

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;;打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。洗板 5 次。加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光 36℃孵箱，避光孵育 15 分钟。加入终止液 100ul/孔, 混匀后即刻测量 OD450 值(3 分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。结果判断: 每个标准品和标本的OD 值应减去空白孔的OD 值。手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD 值可在标准曲线上查出其浓度。若标本OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。灵敏度、特异性和重复性: 灵敏度：最小可测人IL-4 达 7pg/ml。特异性：不与IL－1,2,3,5,6,8,10,12,IFN,TNF 及 sTNF-RII 等反应。重复性：板内，板间变异系数均10%。 IL-4 简介： IL-4 是一种由活化的T 细胞产生的细胞因子，以往称为 B 细胞生长因子 1。在 B 细胞生长的早期活化B 细胞，并使被抗原、抗 IgM 或脂多糖活化的B 细胞进入细胞周期G1 期。IL-4 增强MHCII 类抗原的表达和 CD23（FceRII）在 B 细胞上的表达，诱导同种型（isotype）转换，如促使小鼠 B 细胞从分泌 IgM、IgG3、IgG2b 转变成分泌 IgG1、IgG2a、IgA 和 IgE。也增强单个核吞噬细胞表达 MHCII 类抗原，但对炎症性细胞因子（如IL-1,TNF,IL-8）的释放和这些细胞的杀菌活性有抑制作用。IL-4 也活化细胞毒性 T 细胞，它被认为是典型的由 TH2 细胞产生的细胞因子，对于 T,B 淋巴细胞的发育以及驱动体液免疫反应和抗体产生都是十分重要的。