浙江大学细胞工程第三章课件.ppt

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影响次生物质产量的因素 提高次生代谢产物的方法 1)掌握最佳的操作条件 2)了解调节细胞中次生物质代谢途径和方式 3)材料的选择上要注意突变体,遗传型等 花粉培养(花药看护法) 其它单倍体的途径 1)由未受粉的子房或胚珠培养诱导单倍体的形成 2)利用远缘种杂交引起染色体消除以获得单倍体 高等植物中单倍体的意义和应用 由于单倍体只有一套基因,隐性突变不受显性基因干扰,携带有利突变的单倍体一经发现,就可在一个世代内通过染色体加倍,成为表现有利突变的二倍体。 应用: 1)新品种培育 2)加速纯系获得 3)异源染色体或基因的转移 4)突变体的选择及应用 现状:成功主要局限于茄科,禾本科和十字花科 分离 1)机械法:在细胞质壁分离的状态下,用利刀切割 原生质体培养 3.23植物脱毒培养技术 1)无性繁殖作物,易感染病毒,造成品质下降。 2)如何在一个已经受感染的群体中获得无病植株? a.种子繁殖 b.消除病原菌 3)消除病原菌的方法又是什么? a.热处理:热水或热空气。 b.茎尖培养。 c.愈伤组织培养。 3.24体细胞胚胎发生 体细胞胚: 在离体或活体条件下,由除合子之外的孢子体细胞形成的胚。 体细胞胚胎发生的过程 胡萝卜悬浮细胞的体细胞胚胎发生过程图 影响体细胞胚胎发生的因子 生长调剂物质:诱导培养基 在浓度为0.5-1mg的含有2,4-D生长素的培养基上,愈伤组织会分化形成胚性细胞团。如将胚性细胞团转移到一种生长素很低的的培养基上,会发育成成熟的胚。 氮源:NH 4+,NO3- 其它因子:高钾等 3.3植物细胞突变体的筛选及应用 3.31诱变方法 3.32变异体的分离与鉴定 3.33变异体细胞的应用潜力 用组织培养进行突变研究的意义 可以在比田间试验小得多的空间和较短的时间内,用人工控制的环境对单倍体、二倍体和多倍体细胞进行大量的基因组操纵,在植株水平回收所发生的遗传修饰。 细胞水平上选择出的变异不一定在再生植株水平上表达。 体细胞无性系变异:未受过选择压力之组织培养物,其再生植株出现遗传变异 诱变 突变分类:自发突变和诱发突变 继代过程中会发生染色体的变异。 自发突变的频率低,一般在100万次细胞分裂中才发生一次。 诱发突变利用诱变剂:甲基磺酸乙酯(EMS)、N—甲基—N’—硝基—N—亚硝基胍(MNNG)、紫外线、X射线等,可以增加活细胞中的变异型。 注意:化学诱变剂一般有毒且致癌。 诱变材料多用原生质体和胚。 变异体的分离和鉴定突变体的步骤 1)分离营养缺陷型或温度敏感变异体 负选择法:即在特定的培养条件下,选择出其生长受限制的那些细胞 全数分离法:花药培养产生单倍体植株→原生质体分、培养和诱变→用全数分离法分离一个个单个的集落并试验负选择→鉴定变异系的专一性和重现性→鉴定变异系的稳定性→再生植株作遗传学分析。 2)分离抗性变异体和鉴定突变体的一般步骤 直接选择法:即把细胞置于有毒的化合物(选择剂)协迫下,敏感的细胞不能生长而抗性细胞能够生长从而分离出来。 筛选出的变体异品种 1.营养缺陷型:需泛酸、腺嘌呤、异亮氨酸等 2.抗氯酸盐 3.抗氨基酸或氨基酸类似物 4.抗抗菌素药物:如抗链霉素的烟草突变体 5.抗除草剂:如一种烟草的变异体 6.抗病的:如玉米,马铃薯的变异体 另外:还有抗核酸碱基类似物的烟草突变植物,耐热,耐旱,抗重金属离子,温度敏感的变异体等。 突变细胞系的意义 1)可作为遗传学和遗传工程研究的好材料 如:为遗传研究提供适用的选择标志,分析控制性状的突变基因,识别特点基因,定向诱变等 2)了解代谢和发育过程及其调节 3)利用有益突变,获得实用价值的新类型 3.4植物细胞的大量培养及 次生代谢产物的生长 3.41植物悬浮细胞系 3.42大规模植物细胞培养系统 3.43影响次生代谢物质产量的因素 3.41植物悬浮细胞系 利用悬浮培养可实现大规模培养,获得细胞,初级及次级代谢产物,为药品,食品及化工行业提供服务。 培养基:B5和ER,但没有琼脂,其中无机磷是限制因子。 分类:分批培养和连续培养 悬浮培养应在摇床或转床上进行振动,大多数摇床的转速为30-150转/分,冲程2-3cm。 分批培养 把细胞分散在一定容积的培养基中进行培养,目的是建立单细胞培养物。 一般使用100-250ml的三角烧瓶,每瓶装有20-75ml的培养基。 为使分批培养的细胞能不断增殖,必须进行继代培养。 进行继代培养时可用吸管或注射器,但其困境必须只允许通过单细胞或小细胞团(2-4个) 细胞的生长曲线 连续培养 利用特制的培养容器进行大规模细胞培养的一种培养方式 封闭型连续培养:新培养基补充旧培养基,在培养容器中细胞数目上升 开放型连续培养:新培养基补充的量和流出的旧培养基和细胞的量相等,培养容器内细胞数目恒定。 化学恒定式:以固

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