2021在无氧条件下.ppt

在无氧条件下 ①在乳酸菌中，受乳酸脱氢酶作 用，丙酮酸作为受氢体而被还原 为 乳酸，即为 同型乳酸发酵 ②在酵母个，在丙酮酸脱羧酶作 用下，丙酮酸脱羧生成乙醛， 后者在乙醇脱氢酶作用下，乙醛 为受氢体被还原成乙醇，即 酒精 发酵 ③在梭状芽孢杆 菌中，丙酮酸 脱梭生成乙酰 CoA 。然后经一系 列变化生成丁酰 CoA 、丁醛，两 者作为受氢体被还原为丁醇。生 成物还有丙酮、乙醇，称为 丙酮 丁醇发酵 一、糖嫌气性发酵产品 第十二章 工业微生物发酵产品 调节点主要在三个激酶， 即 己糖激酶、磷酸果糖 激酶和丙酮酸激酶 。它 们是糖酵解途径中的关 键酶，是糖酵解途径的 三个不可逆步骤 糖代谢的调节主 要是能荷的控制 能荷 = ATP ATP 抑制磷酸果糖激酶和丙酮 酸激酶的活性，使酵解减少 当需能反应加强， ATP 分 解为 ADPI 和 AMP ATP ADP 、 AMP 增加、 ATP 的抑制作用 被解除，同时 ADP 、 AMP 激活已 糖激酶和磷酸果糖激酶 乙醇生成机制 在好气条件下，酵母发酵能力降低（呼吸抑制发酵） 巴斯德效应 能荷调节 甘油为合成机制 酵母在一定条件下培养，可以利用糖分生成甘油 酵母的第二型发酵 加入亚硫酸氢钠，与乙醛 起加成作用 生成难溶的乙 醛亚硫酸氢钠加成物 酵母的第三型发酵 当酵母在碱性条件 (pH 7.6) 进行发酵， 二个分子 乙醛起歧化反应，相互氧 化还原，生成等量的乙醇和乙酸 二、柠檬酸发酵 主要生产菌： 黑曲霉 ? 黑曲霉糖质发酵柠檬酸 证明生产菌（黑曲霉）中 80% 的糖代谢走 EMP 途径 生产菌中存在 TCA 的酶系，故有 TCA 存在 草酰乙酸的来源不是由 TCA 供应，而是由 2 个 CO 2 固定提供，故 CO 2 固定 对柠檬酸合成必不可少。 由于不存在苹果酸脱氢酶 丙酮酸羧化酶 PEP 羧激酶 生物合成途径（无碳原子损失） 理论转化率： 106.7% C 6 H 8 O 7 H 2 O 理论转化率： 116.7% 能量平衡 EMP 中底物水平磷酸化 2ATP EMP 途径 2NADH 丙酮酸氧化脱羧 2NADH 可以满足生产菌的维持能量消耗， 不需要消耗 C 源经 TCA 来产能 ? 柠檬酸合成的代谢调节 第一个调节酶是磷酸果糖激酶（ PFK ） Δ 柠檬酸和 ATP 对该酶有抑制 生产菌需要解除该抑制作用 AMP 、无机磷以及 NH 4 + 对该酶有活化作用 NH 4 + 有效解除柠檬酸和 ATP 对该酶有抑 制 ，故生产上通过添加铵盐来提高柠 檬酸产量 Δ Mn 2+ 的影响： Mn 2+ 缺乏 菌体的 TCA 酶活下降 Mn 2+ 缺乏 可能干扰蛋白质合成， 导致蛋白质分解 NH 4 + 水平升高 减少柠檬酸对 该酶的抑制 第二个调节点： CO 2 固定的酶活力高，保证草酰乙酸的供应 第三个调节点： TCA 环上调节 柠檬酸合成酶： 许 多细胞中该酶是 TCA 的调节酶，但在黑 曲霉中此酶无调节作用 顺乌头酸水合酶： 理论上此酶失活 TCA 环阻断 积累柠檬酸 顺乌头酸水合酶需要 Fe 2+ 故在发酵液中添加黄血盐络合 Fe 2+ 阻断 TCA 环，积累柠檬酸 黑曲霉乌头酸水合酶存在于线粒体中，它催化的反应存在着柠檬酸： 异柠檬酸：顺式乌头酸 = 90 ： 7 ： 3 的平衡关系； 黑曲霉 对辅酶 NAD+ 专一性的异柠檬酸脱氢酶活力很低，却有三种依赖 于辅酶 NADP+ 的异柠檬酸脱氢酶，其中的两种与存在于线粒体的酶及 TCA 循环有关，它们受到生理浓度柠檬酸的抑制。 为什么在 A. nigar 中异柠檬酸不会进一步分解及柠檬酸的积累机制？ 三、谷氨酸的发酵 1. 谷氨酸生产菌中存在 2 个糖酵解途径 EMP/HMP 生物素参与糖代谢作用： 增加糖代谢的速度 而丙酮酸氧化脱羧的速度未改变 丙酮酸积累 乳酸积累 2.α - 酮戊二酸脱氢酶缺失 TCA 环阻断， α - 酮戊二酸积累 3. 四碳二羧酸的来源 Δ在生产菌中检出 CO 2 固定反应酶活性 磷酸烯醇丙酮酸 (PEF) 羧化酶和苹果酸酶 谷氨酸对糖的转化率达到 81.7% Δ DCA 循环 标志酶：异柠檬酸裂解酶 在谷氨酸发酵中， DCA 环一方面可以作为 TCA 循环有缺陷时 C4 二羧