宿主Rab22a与CSFV NS4B蛋白相互作用及对CSFV复制增殖的影响.pdf

摘要 摘 要 猪瘟（Classical swine fever ，CSF ）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus ， CSFV ）引起的猪的一种传染病，对养猪业危害很大。真核细胞中囊泡运输途径主要负 责不同细胞器之间的物质运输。Ras 相关 GTP 结合蛋白（Ras-related GTP-binding protein ，Rab ）与囊泡运输有关，具有调节功能，在囊泡转运过程中发挥重要作用。病 毒的生命活动与许多Rab 蛋白相互关联，Rab22a 为Rab 家族小GTP 酶成员，在哺乳动 物细胞中广泛表达。本团队前期通过酵母双杂交研究发现，CSFV 的NS4B 蛋白可能与 Rab22a 存在相互作用。本文就宿主细胞Rab22a 与CSFV NS4B 蛋白相互作用及对病毒 复制增殖的影响进行了研究，获得以下结果： （1）Rab22a 与CSFV NS4B 存在相互作用。Co-IP 试验发现PK-15 细胞内Rab22a 与CSFV NS4B 存在相互作用；GST pull-down 试验结果表明了Rab22a 与CSFV NS4B 之间的作用方式是直接相互作用；激光共聚焦结果显示了 Rab22a 与 CSFV NS4B 在 PK-15 细胞内共定位的现象。 （2 ）Rab22a 对 CSFV 复制具有促进作用。过表达Rab22a 时，CSFV RNA 表达量 在24 h 极显著上调（P ＜0.01 ）、48 h 和72 h 显著上调（P ＜0.05 ），CSFV E2 蛋白在 各时间点均极显著上调 （P ＜0.01 ）；干扰Rab22a 时，24 h 时对 CSFV RNA 表达无显 著影响（P ＞0.05 ），48 h 时CSFV RNA 表达受到显著抑制（P ＜0.05 ），72 h 时受到 极显著抑制（P ＜0.01 ），48 h 和 72 h 时 CSFV E2 蛋白表达均受到极显著抑制（P ＜ 0.01 ，P ＜0.001 ）；突变体Rab22a Q64L 和Rab22a S19N 使CSFV RNA 和E2 蛋白表达 在24 h 时受到显著抑制（P ＜0.05 ），在48 h 时Rab22a Q64L 使其受到显著抑制（P ＜ 0.05 ）、Rab22a S19N 使其受到极显著抑制（P ＜0.01 ），在 72 h 时 2 种突变体均使 CSFV RNA 和E2 蛋白表达受到极显著抑制（P ＜0.01 ）。 （3 ）Rab22a 对 CSFV 增殖具有促进作用。过表达 Rab22a 显著增加 CSFV 子代病 毒产生（P ＜0.05 ），干扰Rab22a 显著抑制 CSFV 子代病毒产生（P ＜0.05 ），突变体 Rab22a Q64L 和Rab22a S19N 在24 h 显著抑制（P ＜0.05 ）、48 h 和 72 h 极显著抑制 （P ＜0.01 ，P ＜0.001 ）CSFV 子代病毒的产生。 综上所述，本研究表明 Rab22a 与 CSFV NS4B 存在相互作用，证明 Rab22a 对 CSFV 的复制增殖起促进作用。研究结果为了解宿主 Rab22a 与 CSFV 的相互作用及对 病毒复制增殖的影响积累了新的科学资料。 关键词：Rab22a 蛋白；NS4B 蛋白；相互作用；猪瘟病毒；复制；增殖 I 西北农林科技大学硕士学位论文 目录 摘 要I ABSTRACT II 文献综述 1 第一章 猪瘟病毒及Rab 蛋白研究进展 1 1.1 CSFV 研究进展················································································1 1.1.1 CSFV 概述 1