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实验项目 实验性质 教学目的和要 求 教学重点与难 点 实验材料 实验容  《医学生物化学实验》教案 第1次课 2学时 3，5-二硝基水酸法（ DNS法）测定还原糖 设计性实验 1、了解糖的还原性 2、掌握还原糖定量测定的原理和方法。 3、熟悉分光光度计的使用方法。 重点 : 绘制标准曲线的方法，分光光度计的使用原理和使用方法。 难点：标准曲线的应用。 1.试剂 （1） 1mg/mL 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖 100mg，加少量蒸馏水溶 解后，以蒸馏水定容至 100mL，即含葡萄糖为 1.0mg/mL 。 （2） 3， 5-二硝基水酸试剂：称取 6.3 g 3， 5-二硝基水酸并量取 262 mL 2mol/L NaOH 加到酒石酸钾纳的热溶液中（ 182 g 酒石酸钾纳溶于 500 mL 水中），再加 5 g 结晶酚 和 5 g 亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到 1000 mL 贮于棕色瓶中。 （3）未知浓度还原糖。 2.材料 小麦淀粉或玉米淀粉。 3.器材 分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。 一、实验原理 ★：在 NaOH 和丙三醇存在下， 3，5-二硝基水酸（ DNS）与还原糖共热 后被还原生成氨基化合物。在过量的 NaOH 碱性溶液中此化合物呈桔红色，在 540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度围，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 OH NO2 OHNH 2 HOOC + 还原 糖 HOOC NO2 NO2 (DNS) （3－氨基 －5－硝基水 杨酸 ） ? 黄色 桔红色 二、实验步骤： 1.取 7 支具塞刻度试管编号，按表 1 分别加入浓度为 1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏 水和 DNS 试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。 表 1 葡萄糖标准曲线制作 管 号 1mg/ml 葡萄糖 蒸馏水 DNS 葡萄糖含 光密度值 标准液 (mL) 量 (mg) (OD-540nm) (mL) (mL) 1 0 0.5 0.5 0 2 0.1 0.4 0.5 0.1 3 0.2 0.3 0.5 0.2 4 0.3 0.2 0.5 0.3 5 0.4 0.1 0.5 0.4 6 0.5 0 0.5 0.5 7（ 未知浓度还原糖 ） 0.5 0 0.5 0.5 将各管摇匀， 在沸水浴中准确加热 5min 取出，冷却至室温， 用蒸馏水补足至 5mL， 加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调波长 540nm，用 1 号管调零点，分别 测出 2~6 号管的光密度值。 2.绘制标曲 ▲ 以光密度值为纵坐标， 葡萄糖含量 (mg)为横坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线 （电脑 Excel 完成最好）。计算 7 号管还原糖的百分含量。 三、结果与计算 ▲： 计算出 7 号管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。 查曲线所得葡萄糖毫克数×提取液总体积 / 测定时取用体积 还原糖 (%) = ——————————————————————————× 100% 样品毫克数 教学过程中师生活动设计 糖的还原性，具有还原性的糖结构有何特点？ 提纲、板书设计 实验原理及反应方程式，实验步骤中表 1 及计算公式 1、为什么要设置空白对照？ 作业 2、标准曲线的定义？ 主要 [1] 《生物化学实验》 ，何幼鸾、汤文浩，华师， 2013 参考资料 [2]《生物化学实验》 ，董晓燕主编，化学工业， 2010 1、让学生理解糖定量测定的原理及方法； 总结分析 2、强调标准曲线的绘制要点； 3、需要和学生一起推导还原糖浓度的公式 《医学生物化学实验》教案 实验项目 实验性质 教学目的 和要求 教 学 重 点与难点 实验材料 实验容  第 2次课 2学时 糖的呈色反应和还原糖检验 验证性实验 1.了解糖类某些颜色反应的原理 2.学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法 重点：颜色反应鉴别糖的方法 难点：鉴别糖的反应原理 1、仪器：试管及试管架、滴管、移液管及恒温水浴锅 2、试剂：莫氏试剂、塞氏试剂、托伦试剂； 1%葡萄糖溶液、 1%蔗糖溶液、 1%淀粉溶液、 1%果糖溶液、 1%阿拉伯糖溶液、 1%半乳糖溶液 一、实验原理 ★： α—萘酚反应：糖在浓无机盐作用下，脱水生成糠醛衍生物，后者在浓硫酸的作用下能与α—萘酚生成紫红色物质，在糖液面与浓硫酸液面间出现紫色环。但一些非糖物质对此反应也呈阳性 间苯二酚反应：在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基醛，后者可与间苯二酚作用生成红 作业 主要 参考资料 总结分析  色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应慢。 托伦反应：戊糖在浓酸作用下脱水生成糠醛，后者可与间苯三酚结合生成樱