基因工程 实验教学教案.doc 7页

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  • 2021-02-21 发布
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    《基因工程》实验教学教案 实验一  实验室仪器使用及安全教育 一、实验目的: 学习实验室相关仪器的使用,了解本实验室药品特性及实验药品分区管理。 二、实验内容: 1、移液器的使用:一个完整的移液循环,包括吸头安装——容量设定——预洗吸头——吸液——放液——卸去吸头等六个步骤。每一步骤都有需要遵循的操作规范。(1)吸头安装:采用旋转安装法,将白色套筒顶端插入吸头,在轻轻用力下压的同时,把手中的移液器按逆时针方向旋转180度。(2)容量设定:选取适当量程的移液器(选0.1-10μL),调节分两步进行,一是粗调,通过排放按钮将容量值迅速调整至接近预想值,二是细调,将移液器横置,水平放置自己眼前,通过调节轮慢慢将容量值调至预想值。(3)预洗吸头:把需要转移的液体吸收排放至2、3次,让吸头内壁形成一道同质液膜,确保移液工作的精度和准度。(4)吸液:将移液器排放按钮按至第一停点,再将吸头垂直浸入液面,平稳松开按钮吸液。(5)放液:吸头紧贴容器壁,先将排放按钮按至第一停点,略作停顿后,再按至第二停点。(6)卸去吸头:卸掉的吸头不能和新吸头混放,以免交叉污染。 2、离心机的使用:(1)离心机放在水平坚固的地板或平台上,力求使仪器处于水平位置。(2)打开电源开关,将预洗平衡好的样品对称放置于转头的样品架上,关闭机盖。(3)旋转定时按钮设定离心时间,缓慢旋转转速调节按钮,使仪器转速达到要求。(4)待离心机完全停止转动时打开机盖,取出离心样品,再次关闭机盖结束离心。(5)离心完毕后,将转速调节旋钮调回零位,关闭电源开关。 注意:对于超速冷冻离心机,应先设定离心温度、速度和时间,待机腔温度达到预定要求,再放入样品。取出样品后,待离心机机腔温度与室温相同时再关闭机盖。 3、电泳仪的使用:电泳仪一般分为自由界面电泳和区带电泳两类。区带电泳需用各种类型的物质作为支持物,分子生物学实验中常用的是琼脂糖凝胶电泳。所谓电泳,是指带电粒子在电场中的运动,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,因此在电场中运动速度不同,根据这一特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组分分析或单个组分提取制备。 电泳仪正是基于上述原理设计制造的。使用方法:(1)按电源开关,同时系统初始化,蜂鸣4声,设置常设置,屏幕转成参数设置状态。(2)设置工作程序,用键盘输入新的工作程序。(3)设置各参数无误后,按“启动”,启动电泳仪输出程序,在显示屏状态栏中显示start,并蜂鸣4声,提醒操作者电泳仪将输出高电压,注意安全,之后逐渐加压至设置值,同时在状态栏中显示“run”,并不断闪烁两个高压符号,在状态下方,显示实验的工作时间。(4)电泳结束,仪器显示“end”,并连续蜂鸣提醒,此时可按一键止鸣。 4、PCR仪的使用:(1)开机:打开开关,视窗上显示“self test”,显示10秒后,run-enter菜单,准备执行程序。(2)放入样本管,盖紧盖子。(3)如要执行已经编好的程序,直接按“proceed”,用箭头键选择已储存的程序,按“proceed”,则屏幕显示: 按“proceed”选择enable,则开始执行程序。(4)其它:用“pause”可以暂停一个运行的程序,再按一次继续程序。 用“Stop”或“Cancel”可停止运行的程序。 如何设置一个PCR体系: 一般分为8步: (1)预变性:可用94~95℃,2~10min,一般用5min。 (2)变性:一般用94℃,30s~2min,一般45s~1min。 (3)退火:温度自定,30s~2min。 (4)延伸:70~75℃,一般72℃,对于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。 (5)循环数:一般25~35 (6)最终延伸:72℃,5~15min。 (7)保存:10℃,时间设为0。 (8)END。 实验二  聚合酶链式反应(PCR) 实验目的 学习聚合酶链式反应(PCR)的原理与技术,了解聚合酶链式反应(PCR)的具体操作过程。 二、实验原理 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合

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    • 内容提供方:pqsczlx
    • 审核时间:2021-02-21
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