第2章发酵工业菌种.ppt

第2章 发酵工业菌种;2.1 发酵工业常用菌种 一、发酵工业对菌种的要求 1 菌种不能是病源菌 2 发酵周期短，生产能力强 3 发酵过程中不产或少产与目标产物性质相似的副产物 4 原料来源广价格低廉，菌种能高效地将原料转化成产品 5 对需添加的前体有耐受能力，且不能将前提作为一般碳源利用;菌种纯，遗传性能稳定，不易变异退化 可以在易于控制的条件下发酵 二、发酵工业常用菌种 细菌： 自然界分布最广、数量最多的一类微生物，单细胞原核生物。 ①工业常用的有枯草杆菌、短杆菌 ②还常用作基因工程载体的宿主细胞，用 于构建基因工程菌来生产外源物质。 ;酵母菌 ： 单细胞真核生物，主要分布于含糖较多的酸性环境中。常用的有啤酒酵母、酒精酵母。 霉菌 ： 是一群在营养基质上形成绒毛状、网状、絮状菌丝真菌的通称。分布于偏酸性环境中，常用的有根霉、毛霉、青霉等 ;放线菌： 最大价值在于能生产多种抗生素，从微生物中发现的抗生素有60%以上的是来自于放线菌。分布于有机质丰富的微碱性环境中。常用的有链霉菌属、小单孢属等。 其它类： ① 药用真菌：如灵芝、茯苓、冬虫夏草等 ② 藻类：如螺旋藻;2.2 发酵工业菌种的分离筛选; 从自然界分离筛选菌种的一般步骤： 样品采集 样品预处理 富集培养 菌种分离 初筛、复筛 性能鉴定 2.2.1 样品采集 总原则是：（1） 样品来源越广，获得新菌种的可能性越大； （2）要了解目标产物的性质和可能产目标产物的微生物种类及其生理特征。 ;①了解微生物的代谢规律。如初级代谢基本相同，但通常丝状菌及产芽孢细菌才能进行次级代谢。 ②考虑微生物的生理特征。如营养类型、生长环境等。;采样深度 离地表5-25cm处较好。 季节条件 避免雨季，一般以秋季最理想。 采样方法 用无菌器具按规范取样，记录采样地点、时间、环境情况等以备考证。;2.2.2 样品的预处理 预处理可提高菌种的分离效率，常使用的方法有： （1） 物理方法： 热处理：常用来减少样品中的细菌数。 膜过滤和离心法：用来浓缩水中的微生 物细胞。 （2） 化学方法： 在培养基中添加某些化学成分来增加特定微生物数量。 ;（3）诱饵法： 将一些固体物质加到待分离的土壤或水中做成诱饵富集目的菌。 2.2.3 富集培养 利用不同微生物生长繁殖对环境和营养的要求不同，投其所好取其所抗，使目的菌成为人工环境下的优势菌。;（1）控制培养基的营养成分：如唯一碳源 （2）控制培养条件：如T、DO、pH、添加抑制剂等 2.2.4 菌种分离 常用的纯培养分离方法有： （1）平板划线法 （2）稀释分离法 （3）简单平板分离法 （4）涂布分离法 （5）毛细管分离法 （6）小滴分离法; 通常某些菌种在分离时就可进行筛选，一般这些菌在平板上培养时，其产物可与指示剂、显色剂或底物等反应而直接定性地鉴定。 常用的平板快速检测法有： （1）变色圈法 （2）透明圈法 （3）生长圈法 （4）抑菌圈法;2.2.5 菌种的初筛和复筛 目的是选择产物合成能力较高的菌株。并不是所有菌种都能利用平板快速检测法鉴定，因此就要使用常规的生产性能鉴定，即初筛和复筛。 （1）初筛：以量多为原则 （2）复筛：结合生产工艺条件;2.3 性能鉴定 （1）确定菌种类型 （2）测定一系列生产指标，包括菌种毒性试验和生产性能鉴定。 常用的鉴定菌种的方法有： （1） 经典的分类鉴定法（细胞的形态和习性） （2）现代分类鉴定法（遗传型的鉴定、细胞化学成分等） （3）将菌种送到权威机构鉴定;2.4 发酵工业菌种改良 一、菌种改良目的： 1 提高产物产量 2 提高产物纯度，减少副产物 3 改良菌种性能，改善发酵过程 4 改变生物合成途径，获得高新产品;二、菌种改良的方法 1 自然选育： 在生产过程中，不经过人工处理，利用微生物的自然突变而进行菌种筛选的过程。 引起自然突变的因素