食品中微生物标准检验与分析技术可修改.ppt

检测程序---分离 分离培养基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX等，但首选仍然是OXA。分离原理主要是基于李斯特氏菌具有β－D－葡萄糖苷酶的活性，能水解培养基中的七叶灵，产生七叶苷，与铁离子产生颜色反应而，使菌落为棕褐色，并带有褐色晕圈，而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能发生这种反应 还有一些选择性显色培养基，如BCM、ALOA、CHROMagar listeria、Rapid’L. mono等，其原理主要是检测由毒力基因编码的溶血素，而此种溶血素只存在于单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，因而可以很好的将此两种菌同李斯特属的其他种分开。 .精品课件. * OXA平板 单核增生李斯特氏菌 ATCC 19117 48h，35℃培养 .精品课件. * OXA平板 无害李斯特氏菌ATCC 33090 48h，35℃培养 .精品课件. * 检测程序---鉴定 蓝色菌落检验（Henry illumination） 典型运动：相差显微镜，轻微旋转或翻跟头 动力试验：7天，伞形生长 过氧化氢酶试验：阳性 革兰氏染色：阳性短杆菌 溶血试验：穿刺接种血平板 硝酸盐还原试验：5天，阴性 糖发酵试验：葡萄糖、麦芽糖和七叶灵，李斯特菌属反应均为阳性，除格氏李斯特甘露醇阴性，李斯特其他种甘露醇阴性，木糖和鼠李糖最有检测意义 .精品课件. * 检验程序 ——鉴定之凝固酶试验 金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别的主要试验是测定其凝固酶。 方法一：试管法 吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球肉浸液肉汤培养物0.5mL，振荡摇匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。 第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 .精品课件. * 试管法 第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 .精品课件. * 阳性反应 阴性反应 不凝固 少量、零散凝固 明显的块状凝固 巨大块凝固 完全凝固，倒置不流动 第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 .精品课件. * 有凝块 血浆 均匀混浊 生理盐水 方法二：玻片法 在一张洁净玻片中央加1滴生理盐水，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经10~20s内无自凝现象发生，则加入人或兔新鲜血浆1环（不用稀释），与菌悬液混合，观察结果 。 第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 .精品课件. * 兔血浆制备 成分：柠檬酸钠0.106 mol/L （31.3g Na3C6H5O7·2H2O溶于1L蒸馏水中） 制法：一份加兔血9份混合后离心2000rpm，10min吸取上清液即为兔血浆。 第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 .精品课件. * 葡萄糖肉浸液肉汤的制备 成分：绞碎牛肉500g，氯化钠5g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾2g，葡萄糖10g，蒸馏水1000mL，pH7.4～7.6。 制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g，与蒸馏水混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH，煮沸并过滤、分装，121℃30min高压灭菌。 第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 .精品课件. * 25g样品+ 225ml 生理盐水 5mL样品匀液（1:10）+ 50mL胰酪胨大豆肉汤 血平板 36± 1℃ 24hr 镜 检 与 肉浸液肉汤培养 血浆凝固酶 试验 报告结果 定性 检测 36± 1℃ 24hr 36± 1℃ 24hr 36± 1℃ 6hr BP平板 第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 .精品课件. * 25g样品+ 225ml 生理盐水 选三个连续梯度，每个梯度分别取1mL接种之至表面干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL） 平板计数（分别记录每种类型的菌落数） 36± 1℃ 48hr 血平板、镜 检与 肉浸液肉汤培养 血浆凝固酶试验 报告结果 金葡菌数/g(mL) 定量 检测 （平板法） 每种类型选取一个菌落 36± 1℃ 24hr 36± 1℃ 6hr 适用于检测金黄色葡萄球菌数不小于10/g（mL）的食品 计算办法：（三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加）×血浆凝固酶阳性数÷5 ×稀释倍数 梯度稀释 第五章 食品中微生物标准检验与分析技术 .精品课件. * 第一天 器材准备、样品处理、增菌培养和BP平板分离接种