定稿食品微生物检验基础知识.ppt

染色细菌标本检查法 －－荚膜染色法 制片：在载玻片一端加一滴6％葡萄糖液，取少许培养72h的被检样菌与其充分混合，再滴一滴新配制的黑色素溶液（或墨汁），混匀。左手持载玻片，右手拿另一光滑的载玻片（推片），将推片一端边缘置于菌液前方，然后稍后后拉，当接触菌液后，轻轻地左右移动，使菌液沿推片接触后缘散开，以30。 角迅速而均匀地将菌液推向玻片另一端，将菌液涂成一薄膜，风干。 染色：加番茄红染色液于标本上，30s后，用细水流适当冲洗。 干燥、镜检：背景成黑色，菌体呈红色，荚膜无色 结果与讨论 按上述方法，在番茄红之前，用甲醇固定1min亦可； 按上述方法，用石炭酸复红液代替蕃红液，染色2min，结果同上。 Tyler法：主要采用结晶紫冰醋酸染色液染色5~7min。然后用20％CuSO4 水溶液洗涤，干燥后镜检。结果荚膜呈蓝紫色，细胞暗蓝色。 .精品课件. * 第六节、培养基制备、灭菌技术 ----玻璃器皿的清洗 在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。 1、新购的玻璃器皿 除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。 2、用过的玻璃器皿 凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。 .精品课件. * 培养基制备技术 ----培养基分类 根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分： １）天然培养基 天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。用这些物质配成的培养基虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛，而且来源广泛，配制方便，所以较为常用，尤其适合于配制实验室常用的培养基。这种培养基的稳定性常受生产厂或批号等因素的影响。 ２）合成培养基 合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基，它是用已知化学成分的化学药品配制而成。这类培养基化学成分精确、重复性强，但价格昂贵，而微生物又生长缓慢，所以它只适用于做一些科学研究，例如营养、代谢的研究。 ３）半合成培养基 在合成培养基中，加入某种或几种天然成分；或者在天然培养基中，加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。例如马铃薯蔗糖培养基等。这种培养基在生产实践和实验室中使用最多。 根据培养基的物理状态来区分： １）液体培养基 所配制的培养基是液态的，其中的成分基本上溶于水，没有明显的固形物，液体培养基营养成分分布均匀，易于控制微生物的生长代谢状态。 ２）固体培养基 在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等，以琼脂最为常用。固体培养基在实际中用得十分广泛。 ３）半固体培养基 如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在0.2~1%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。 .精品课件. * 培养基制备技术 －－培养基的分类 根据培养基的用途来区分： (1)通用培养基：培养异氧细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基；配制适合于厌氧菌生长的培养基时，通常须在培养基中加入适量的还原剂如巯基醋酸钠、维生素C或半胱氨酸来降低培养基的氧化还原电位，以利于厌氧菌的生长。 (2)鉴别培养基：是一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只需用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找出目的菌落的培养基。(伊红－美蓝琼脂、乳糖胆盐发酵培养基、亚硫酸铋琼脂、微生物快速显色培养基） (3)选择性培养基：根