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灰枣田间愈伤组织诱导多倍体的育种方法研究■农学论文 灰枣田间愈伤组织诱导多倍体的育种方法研究 灰枣田间愈伤组织诱导多倍体的育种方法硏究 闫 超，苏彩霞，刘 晓红，李海涛,安 安 （河南省新郑市红枣科学研究院，河南 新郑 45口00 ） 摘要：以灰枣为试材，研究不同生长调节剂、截干高度、覆盖方式、AgN03浓 度、二甲基亚飒及秋水仙素浓度对愈伤组织形成和不定芽形成的影响，获得一套 适合灰枣田间诱导多倍体的育种方法。 关键词:灰枣；愈伤组织；诱变；四倍体 多倍体是指 体细胞中含有3个或3个以上染色体组（Genome ）的个体,是植物最重要的 进化方式之一⑴。目前，田间枣树茎尖诱变和组培条件下胚性细胞诱变均已取 得明显进展。但茎尖诱变后,多获得嵌合体,分离纯化所需周期长；组培条件下 通过胚状体途径虽可快速获得纯合多倍体，但仍存在从组培苗炼苗下地到开花结 果周期长的问题［2?5］。因此，在田间诱导胚性愈伤组织获得纯合多倍体是一项 更为理想的技术方法，不仅可以快速诱导获得纯合多倍体，而且加倍不定芽当年 可发育形成木质化枝条，用于嫁接扩繁，可大大缩短多倍体育种周期,同时可彻 底解决嵌合体纯化难题⑹。 枣树多倍体与二倍体相比具有更高水平的杂合性,常带来一些形态 和生理上的变化，在增大果个、提高生长速度、增进遗传品质以及提高目的代谢 物含量等方面具有优势。因此,灰枣多倍体育种能够增加新品种的数量，大大提 高枣品种的质量，对解决目前新郑红枣普遍出现果个小、色泽差、含糖量和其它 营养成分下降等问题,满足生产者和消费者需求具有重要意义。 材料与方法 试验材料 大田所用试验材料为优良鲜食制干兼用枣品种灰枣（新郑市红枣科 学研究院试验园X 试验方法 采用枝干短截的方法，把灰枣树处理成树桩，每棵树短截的枝干数 以5 ~ 7个枝为佳,同时留取1~ 2个辅养枝，去除其余细小枝条。用脱脂棉绕 截面形成层覆盖1圈，将诱导愈伤的药液滴加在脱脂棉上,以浸湿脱脂棉为佳, 覆盖处理。 1.2.1 不同生长调节剂对形成愈伤的影响 处理灰枣树枝干，滴加7个处理药液（清水、2,4?D、ZT、TD乙 NAA、TDZ与TBA、ZT与NAA ）,将脱脂棉充分浸湿，每个处理25个枝，覆 盖泥和黑色塑料袋z 15 d后观察愈伤形成。 122 截干的不同咼度对形成愈伤的影响 处理灰枣树枝干，截留距离地面1 m以上和1 m以下2种高度枝 干，用脱脂棉绕截面形成层覆盖一圈，用滴管将TDZ 4.0 mg/L + AgNO3 2.0 mg/L药液滴于脱脂棉上，以浸湿脱脂棉为宜。然后用塑料袋+泥+塑料袋 覆盖截面,每个处理10个枝,观察枝干截面愈伤形成情况。 不同覆盖方式对形成愈伤的影响 处理灰枣树枝干，用TDZ 4.0 mg/L + AgNO3 2.0 mg/L药液 浸湿形成层上铺设的脱脂棉，然后采用〃塑料袋+泥+塑料袋〃、〃泥+ 塑料袋〃和〃黑塑料袋〃 3种覆盖方式，每种覆盖方式10个枝干,观察枝干截 面愈伤形成情况。 不同浓度AgN03对形成愈伤的影响 处理灰枣树枝干，用浓度为1.0 mg/L、2.0 mg/L 3.0 mg/L、4.0 mg/LAgNO3溶液分别滴于脱脂棉上，每个处理5个枝，用塑料袋+泥+塑 料袋覆盖截面,观察枝干截面愈伤形成情况。 二甲基亚飒对形成愈伤的影响 在 0.05%秋水仙素 + TDZ 4.0 mg/L+ AgNO3 2.0 mg/L 药液中添 加二甲基亚砚,浓度配为2% ,把含有2%二甲基亚砚（DMSO ）的混合药液处 理灰枣树枝干截面；另外做不加二甲基亚飒的对照处理（其他成分同上），塑料 袋+泥+塑料袋覆盖，观察枝干愈伤形成情况。 不同浓度秋水仙素对形成愈伤及不定芽发生的影响 处理灰枣树枝干肥含有秋水仙素（0、0.010%、0.025%、0.050%、 0.075% ） + TDZ 4.0 mg/L + AgNO3 2.0 mg/L的药液滴加于枝干截面形成层 铺设的脱脂棉上,处理时间为1 d（第2天去掉脱脂棉）,同时做1个完全清水 的处理，观察记录每个处理枝干截面愈伤形成及不定芽发生情况。 结果与分析 2.1 不同生长调节剂对形成愈伤的影响 由表1可知，生长调节剂不同，灰枣枝干愈伤发生情况也不同。TDZ 出愈率最高，达到了 72%。 截干高度对愈伤形成的影响 注：采用两样本率比较，決表示同一灰枣品种不同处理截面出愈率 差异达到显著水平，下表同。 由表2可知，截干高度不同，其截面愈伤发生情况显著不同。灰枣 1 m以上枝干截面比低于1 m枝干截面易于发生愈伤，出愈率差距达到了 50%。 同_品种高枝干截面出愈率高于低枝干截面,这可能与顶端优势有关。 不同覆盖方式对形成愈伤的影响 由表3可知，塑料袋+泥+塑料袋覆盖后枝干截面愈伤岀愈率 最高,达100% ,而且愈伤发