试验四-细菌及其所致病害2012.ppt

实验四 细菌病原及其所致病害 中国农业大学植物病理学系 张力群 教授 Tel ：； Email ： zhanglq@cau.edu.cn 2012.10.16 试验目的： ? 了解细菌病原及其所致病害特点； ? 学习病原细菌分离纯化技术； ? 学习植物病原细菌的接种方法，了解植物病原细 菌的侵入方式； ? 证明细菌的致病性（柯赫氏法则）。 细菌在植物上引起的症状 ? 坏死： 叶枯和叶斑 （水渍状） ? 腐烂： 果蔬、块茎 / 根的软腐 ? 萎蔫： 全株性，青枯 ? 畸形： 肿瘤、发根， 丛枝 ? 变色： 黄化 --- Xanthomonas, Pseudomonas --- Erwinia, Pantoea --- Ralstonia, Clavibacter, Pantoea --- Agrobacterium, Phytoplasma, Spiroplasma --- Phytoplasma, Spiroplasma Pseudomonas sp. 引起菜豆 豆叶斑 坏死 necrosis Pseudomonas sp. 在番茄上造成的 叶斑和果斑 Erwinia sp. 引起苹果火疫病 Xanthomonas sp. 引起青椒叶斑 腐烂 rot Erwinia spp. 引 起多种作物软腐 萎蔫 wilt Ralstonia spp. 引起 多种作物萎蔫病 维管束变色 畸形 malformation Phytoplasma sp. 引 起枣疯病（丛枝） Agrobacterium sp. 引起根癌 Phytoplasma sp. 引起番茄黄化 Phytoplasma sp. 引起椰树死黄病 变色 discoloration Liberibacter sp. 引起柑桔黄龙病 Pseudomonas sp. 引 起大豆细菌性疫病 ? 菌溢（ bacterial ooze ）： 发病（萎蔫）植物组织放 入盛有水的试管或平皿中 排出云雾状扩散物；高湿 条件下，发病植物组织泌 出的脓状物。 细菌性病害的鉴定性病征： ? 室内镜检 ? 喷菌（菌溢）现象 ? 细菌病害特有 ? 分离培养 ? 选择性培养基 ? 致病性检测 ? 过敏性坏死反应 具有病原性的细菌接种到植 物组织（烟草）后，接种位 点附近组织迅速坏死。 ? Koch ' s 法则 实验内容 ? 大白菜 软腐病菌的分离：系列稀释法； ? 大白菜 软腐病菌的接种：伤口接种； 实验材料和用具 ? 植物病原细菌：胡萝卜软腐欧文氏菌 （ Erwinia carotovora ） ? 植物材料：大白菜 ； ? 牛肉膏蛋白胨培养基； ? 70% 乙醇溶液； ? 灭菌水、移液器、震荡器、接种针、镊子、剪 刀、玻棒、涂布器、灭菌塑料离心管、试管架、 保湿盒、记号笔、吸水纸、酒精灯、打火机等 ? 细菌分离纯化的方法： ? 平板划线法； ? 系列稀释法； 大白菜软腐病菌的分离 ? 选取新鲜发病的大白菜叶片，健康叶片； ? 对待分离部位进行表面消毒（ 70 ％乙醇）； ? 用灭菌刀片切取 0.5 × 0.5 cm 病健交界处植物组 织，置于灭菌离心管中； ? 加入 0.5mL 灭菌水，用玻璃棒充分碾碎，震荡； ? 系列稀释 4 次； ? 取第 2 ， 3 ， 4 次稀释液各 50 ? L ，均匀涂板； ? 菌液被培养基吸收后，反转放置， 28 ℃培养。