气相色谱-质谱分析植物精油-教材11.pdfVIP

实验42 气相色谱-质谱联用技术分析植物精油成分 【实验目的】 1. 了解气相色谱-质谱仪的工作原理、基本结构。 2. 学习使用气相色谱-质谱仪对未知挥发性有机化合物结构定性分析。 3. 掌握天然产物中挥发性有机化合物的提取和样品前处理方法。 【实验原理】 气相色谱法 （gas chromatography, GC ）是一种应用非常广泛的分离手段，它 是以惰性气体作为流动相的柱色谱法，其分离原理是基于样品中的组分在两相间 分配上的差异。质谱 （mass spectrometry, MS ）法是利用带电粒子在磁场或电场 中的运动规律，按照质荷比进行分离分析。它可以给出化合物的分子量、分子式 和结构信息，具有定性专属性、灵敏度高、检测快速等特点。将色谱法与质谱联 用，可解决色谱定性困难的问题。气相色谱-质谱联用 （GC-MS ）是最早实现商 品化的色谱联用仪器。GC-MS 被广泛应用于复杂组分的分离与鉴定，它具有GC 的高分辨率和质谱的高灵敏度，是各种有机物定性定量的有效工具。 柑橘、柠檬、橙等果皮中含有香味独特的挥发油，具有提高情绪和缓解 焦虑的作用。挥发油中主要风味成份是萜烯类化合物，其中80% 以上是柠檬烯。 目前，提取柑橘类植物精油的主要方法有冷榨法、蒸馏法、溶剂萃取法和超 临界流体萃取法。其中，冷榨法通过压力作用将柑橘外果皮上的油囊细胞压 破，使精油渗出，经分离、精制得到冷榨精油。蒸馏法是将柑橘皮放入蒸馏 器中，用水蒸气汽提，柑橘外果皮上的油囊细胞在高温作用下破裂，精油渗 出后随水蒸气馏出，经冷凝、分离和精制后得到蒸馏精油。溶剂萃取法采用 己烷、石油醚、异丙醇、乙酸乙酯等有机溶剂萃取植物精油成分；超临界流 体萃取法主要采用超临界二氧化碳流体进行萃取。 本实验采用GC-MS 分析市售柑橘、柠檬和橙皮精油成分，混合样品经GC 分离成单一组份，并进入离子源，在离子源样品分子被电离成离子，离子经 过质量分析器之后即按m/z 顺序排列成谱，经检测器和计算机采集并储存质 谱，经过适当处理可得到样品的色谱图、质谱图等。比较不同果皮精油成分 1 差别，并分别采用冷榨法和水蒸气蒸馏提取以上三种果皮中植物精油，采用 GC-MS 分离分析以及结构定性，分析不同提取方法所得成分的差别。 【仪器试剂】 1 仪器 气相色谱-质谱联用仪：Trace GC-Trace DSQ （美国菲尼根质谱公司）；水蒸气 蒸馏装置。 2 试剂 新鲜橘皮、橙皮和柠檬皮、正己烷、无水硫酸钠 （以上试剂均为分析纯）。有 机相针式过滤器 （13 mm×0.45 μm）；市售橘皮精油、橙皮精油和柠檬精油。 3 GC-MS 分析条件 色谱柱为DB - 5 MS (30 m ×0. 25 mm ×0. 25 μm)弹性石英毛细管柱，进样口温 度280 ℃；分流比为1：30 ；色谱柱程序升温条件:初始温度设定50 ℃，保留2 min, -1 - 1 以10 ℃·min 升温至80 ℃，保留2 min ，再以12 ℃·min 升温至150 ℃，保留3 min,最后以15 ℃·min – 1升温至290 ℃，保留1 min。载气流速1.0 mL ·min – 1，恒流 模式；接口温度280 ℃；质谱质量扫描范围为10～500 amu，扫描速度5 次·s – 1， 离子源温度230 ℃，溶剂切割时间3 min ，载气:高纯氦气（99.99% ）。 【实验步骤】 1. GC-MS仪器准备 按仪器操作要求开机，抽真空，待真空度达到要求，通过“峰监控”窗口检查 仪器状况，必要时进行调谐，校正仪器。 2. 样品前处理 （1）市售植物精油样品制备 分别称取市售橘皮精油、橙皮精油和柠檬精油0.05 g，加入10 mL 丙酮，混 匀定容。将上述溶液稀释50 倍，用一次性注射器吸取1 mL，有机相针式过滤器 过滤转移至样品瓶中，进样1 μL 。 （2 ） 冷榨法提取植物精油 取新鲜橘皮、橙皮和柠檬皮，在研钵中研磨压榨，快速加入5 mL 丙酮到研 2 钵中，用一次性注射器吸取，干燥除水，有机相针式