细胞培养仪器.docVIP

原代仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37°C）,培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、 管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37C）银子 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank s液,碘酒PBS 传代培养材料和试剂 1?细胞：贴壁细胞株 试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清） 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管（2ml 3只以上、5ml3 只以上）、废液缸、酒精灯、酒精、纸.封口膜、枪及枪头.标记笔等 紫外灯照射细胞室30 紫外灯照射细胞室30分钟，风机运行10分钟后方可进入实验室. 穿专用的口罩，帽子，拖鞋，工作衣等. 带手套，并用酒精擦拭之. 准备好实验必需用品. 超净工作台内操作前用酒精棉球擦拭台面. 超净工作台内操作完成后， 要用酒精棉球擦拭台面，除了酒精灯，银子，试管架等物品外,其他都要拿出 工作台外.紫外灯照射30分钟. 1? 2? 3? 4? 5? 6? 传代： 1?把细胞培养瓶从培养箱中拿出，拧紧盖子； 观察瓶内培养基的颜色，是否浑浊等；放在倒置显微镜下观察细胞生长 状况。 放入超净工作台内，点燃酒精灯，拿培养瓶口在酒精灯火焰上转两圈以 上，至少三秒。 4.5. 4.5. 拿出PBS瓶子，烧瓶口和银子；用银子将塞子取出，烧瓶口（至少10 ）o 6.7.用吸管吸取3ml的PBS,打入培养瓶内。烧培养瓶口，来回晃动PBS100 次后到掉PBS。重复此操作一次。 6. 7. 拿出胰酶瓶子，烧瓶口和镶子；用银子将塞子取出，烧瓶口（至少10 圈）。 9.L-aii用吸管吸取lml的胰酶，打入培养瓶内，烧培养瓶口和盖子，盖上盖子; 拿出工作台外，在倒置显微镜下观察细胞，然后用酒精棉球擦瓶口及身, 放入培养箱内；5 9. L-aii 在倒置显微镜下观察细胞的消化情况。若细胞变成单个圆形，则可进 行传代。 11?拿到工作台内，烧瓶口，取下盖子，烧瓶口。用吸管吸出胰酶，烧瓶 口。 )o拿出培养基瓶子，烧瓶口和蹑子；用蹑子将塞子取出，烧瓶口（至少 10圈 )o 用吸管吸取5ml的培养基打入培养瓶内，用吸管吹打成单个细胞悬液。 计数，分装即可。 用吸管吸取5ml-8ml的培养基打入培养瓶内，烧瓶口，银子和盖子； 盖上盖子，倒置显微镜下观察，之后标明名称和日期，酒精棉球擦瓶 口和瓶身，放入培养箱内即可 注意： 1 ?打开培养箱时尽量不要说话； 2?步骤9中培养瓶放入培养箱时，应把盖子拧开少许。 换夜： 准备事项： 1.2.3.4.紫外灯照射细胞室30 1. 2. 3.4. 穿专用的口罩，帽子，拖鞋，工作衣等. 带手套，并用酒精擦拭之. 准备好实验必需用品. 超净工作台内操作前用酒精棉球擦拭台面. IH超净工作台内操作完成后，要用酒精棉球擦拭台面，除了酒精灯，银子，试管 架等物品外，其他都要拿出工作台外. IH 紫外灯照射30分钟. 材料与试剂： 细胞：贴壁细胞株 试剂:0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）PBS 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管（2ml 2只以上、5ml3只 以上、10ml 2只以上）、废液缸、酒精灯、酒精、纸、封口膜、枪及枪头、银子、 标记笔等 步骤： L把细胞培养瓶从培养箱中拿出，拧紧盖子； 观察瓶内培养基的颜色，是否浑浊等;放在倒置显微镜下观察细胞生长状 况。 放入超净工作台内，点燃酒精灯，拿培养瓶口在酒精灯火焰上转两圈以上, 至少三秒. 取下盖子，烧瓶口;倒掉培养基，烧瓶口; 拿出PBS液瓶子，烧瓶口和蹑子;用银子将塞子取出,烧瓶口（至少10圈。 6.用吸管吸取3ml的PBS,打入培养瓶内。烧培瓶口，来回晃动PBS100 次后到掉PBS。重复此操作一次。 拿出培养基瓶子，烧瓶口和银子；用蹑子将塞子取出，烧瓶口（至少10 银子和盖子；酒精棉球擦瓶口用吸管吸取5ml?8ml 银子和盖子；酒精棉球擦瓶口 盖上盖子，倒置显微镜下观察，之后标明名称和日期, 和瓶身，放入培养箱内即可。 注意: 1 ?打开培养箱时尽量不要说话； 2?步骤9中培养瓶放入培养箱时，应把盖子拧开少许。 冻存： 准备事项： 1.2.3.4.5.6. 1. 2. 3. 4. 5.6. 带手套，并用酒精擦拭之. 准备好实验必需用品. 超净工作台内操作前用酒精棉球擦拭台面. 超净工作台内操作完成后，要用酒精棉球擦拭台面，除了酒精灯，银子，试管 架等物品外，其他都要拿出工作台外. 紫外灯照射30分钟. 材料与试剂： 细胞：贴壁细胞株 试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）PBS 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管（2ml 5只以上、5ml5 只以上、10ml 2只以上）、废液缸、酒精灯.酒精、纸、封口膜