临床免疫检验技术_第一单元_抗原抗体反应_第九章_抗原抗体反应.pptVIP

第九章 抗原-抗体反应 抗原抗体反应特点。 影响抗原抗体反应因素。 抗原抗体反应原理。 本章要点 目　录 抗原抗体反应原理 1 抗原抗体反应特点 2 抗原抗体反应的影响因素 3 抗原抗体反应类型 4 抗原抗体在体内体外能发生特异性结合。由于抗原理化性状和抗体类型不同，抗原抗体结合后表现出不同的反应类型，可用于疾病的诊断、病原鉴定、药物分析等检测。 如何利用抗原抗体反应的特点准确的进行免疫学检测是一个重要内容。 前 言 第一节 抗原抗体反应原理 基本概念 抗原抗体反应　 抗原与抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。 抗原抗体反应的原理和物质基础: 抗原表位与抗体高变区间的互补结合 在极短距离内才能发生 一、抗原抗体结合力 静电引力：又称库伦引力 指带电离子基团（如：—NH3+和COO-）之间的引力，距离越近引力越大。 范德华引力： 　 原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，其决定分子空间构型。能量小于静电引力。 氢键： 由分子中H原子与电负性大的O和N原子等相互作用形成的引力，结合力较范德华力强，因为需要受氢体和供氢体之间的互补形成氢键，因此更具有特异性。 疏水作用： 疏水集团相互排斥水分子而趋于聚集的力。作用力最强，占总结合力的50%。 二、抗原抗体亲和性和亲和力 亲和性 (affinity) 抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间的结合强度，用平衡常数K值表示，K值越高抗原抗体结合越牢固 亲合力(avidity) 　 一个完整的抗体结合部位与若干个抗原表位之间结合的强度。 三、亲水胶体转化为疏水胶体 形成可见抗原抗体反应 抗原/抗体 结合 水化层变薄，失去亲水性 电解质 中和胶体粒子表面电荷，使各疏水胶体进一步靠拢 疏水胶体 第二节 抗原抗体反应的特点 特异性：抗原与抗体结合反应的专一性。 分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性。 交叉反应：两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应。 缺点：影响检测的准确性 优点：协助检测 一、特异性 抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 （非共价键结合） 影响因素： 抗体对相应抗原的亲合力：亲合力越高，结合越牢固，越不易解离。 环境因素对复合物的影响：pH（破坏离子间的静电引力）、离子强度（破坏离子间的静电引力） 二、可逆性 前带(prezone)：抗体过量 后带(postzone)：抗原过量 等价带(equivalence zone)：抗原抗体比例合适 三、比例性 免疫学检测时，由于带现象的干扰，导致假阴性结果。 第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见（数秒或数分钟内完成）。 第二阶段：反应可见阶段，反应慢（数分钟或数小时或数日）），出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象。受电解质、温度和酸碱度影响。 四、阶段性 第三节 抗原抗体反应的影响因素 一、自身因素 抗原： 抗体 来源： 驴和马免疫血清：等价带较窄（H型抗体） 兔：等价带较宽（R型抗体） 浓度：比例合适出现可见反应 亲合力 可溶性抗原＋相应抗体→沉淀 颗粒性抗原＋相应抗体→凝集 单价抗原－－不凝集或沉淀 二、环境因素 电解质：中和胶体粒子上的电荷，使胶体粒子的电势下降，促使抗原抗体复合物从溶液中析出，形成可见的沉淀物或凝集物。 酸碱度：蛋白质具两性电离特性，有其故有的PI ，pH达到或接近颗粒性抗原的PI时，引起的抗原非特异性自身凝集现象。 温度：温度升高可加速分子运动，使反应加速。但若温度高于56℃时，可导致已结合的抗原抗体再解离，甚至变性或破坏。 第四节 抗原抗体反应类型 反应类型 实验技术 结果判断 凝集反应 直接凝集试验 观察凝集现象 间接凝集试验 同上 抗球蛋白试验 同上 沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀，检测浊度 免疫电泳技术 观察扫描沉淀峰、沉淀弧 补体参与的反应 补体溶血试验 观察测定溶血现象 补体结合试验 同上 抗原-抗体反应的类型 反应类型 实验技术 结果判断 中和反应 病毒中和试验 检测病毒感染性 毒素中和试验 检测外毒素毒性 标记免疫反应 荧光免疫技术 检测荧光现象 放射免疫技术 检测放射性强度 酶免疫技术 检测酶底物显色 发光免疫技术 检测发光强度 金免疫技术 检测金颗粒沉淀 抗原-抗体反应的类型 小 结 掌握抗原抗体结合力和抗原抗体反应的特点。 影响抗原抗体反应的因素包括反应物的自身因素和环境因素。 免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫学技术有凝集反应、