引物退火温度与Tm值的关系-tm退火温度公式.docxVIP

引物设计SUM 引物设计SUM 页脚内客 页脚内客7 退火温度与％值 ①在％值允许范用内，选择较髙的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合, 提高込反应的特异性。复性时间一般为％?必这，足以使引物与模板之间完全结合。 ②引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度： %值（解链温度）=4（护?乜（卅F复性温度=%值-（5?QC） ③％对于设立妙7退火温度是必需的。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同 目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从％。C到70 J 退火温度一般设左比引物的％低S°C。 ④引物退火温度 退火温度决泄込特异性与产量，温度高特异性强，但过髙则引物不能与模板牢固结合, 羽“扩增效率下降，温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。一 般先由M7°C反应条件开始，设置一系列对照反应，以确左某一特左反应的最适退火温度。 也可根据引物的$+0%含量进行推测，把握试验的起始点，一般试验中退火温度现 如坷憑讪比扩增引物的融解温度认血叫如他也⑹低北，可按公式进行计算： % = % - 5°C= “矽十彳十 2（^+y）-rc 其中〃 7.彳，E分別表示相应碱基的个数。例如，％个碱基的引物，如果$十彳％含量 为时，则久的起点可设在於C。在典型的引物浓度时（如0?即剧“退火反应数秒即可 完成，长时间退火没有必要。