《检疫检验实验》课件.pptVIP

食品中中大肠菌群的检验(依据 ：GB 4789.3-2003) 将产酸产气的可疑阳性管 分别划线EMB平板 37 ℃ 24h 37 ℃ 24h 挑取可疑菌落革兰氏染色镜检 证 实 试 验 挑取G-菌落接种 每管分别接种1ml原液 每管分别接种1ml 10-1稀释液 每管分别接种1ml 10-2稀释液 每管分装5ml单料乳糖胆盐蛋白胨培养基 25ml检样 选择3个连续的稀释度 225ml 乳糖蛋白胨液 查MPN表 报告结果 37 ℃ 24h 报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）检样中大肠菌群的MPN值。 225ml 25ml检样 选择3个连续 的稀释度 10-1稀释液 10-2稀释液 10-3稀释液 将产气的 可疑阳性管 BGLB验证试验 LST初发酵试验 食品中中大肠菌群的检验(依据 ：GB 4789.3-2010) 查MPN表 报告结果 37 ℃ 48h 37 ℃ 48h 报告 根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告 每ml（g）大肠菌群的MPN值。 注意事项 2、倾注EMB平板前应先摇匀；储存EMB培养基及用EMB培养细菌时都应避光。 1 操作要在严格无菌的状态下进行；且操作时间越短越好。 3、样品不同，选择的稀释倍数不同。 MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。 5、大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。 4、发酵管在灭菌以后要检查小导管内有无气泡,如果有气泡就不能再用了。 6、挑菌落进行革兰氏染色镜检时，一定要挑取典型菌落，如无典型菌落则应多挑几个，以免出现假阴性。 　 进度安排（GB5750.12-2006，GB4789.3-2003） 14日： 配置培养基、分装、灭菌 准备生理盐水、枪头、吸管等耗材，灭菌 样品采集、稀释及接种 15日： 观察实验现象 将可疑阳性管划线EMB平板 16日： 观察实验现象 挑可疑菌落革兰氏染色镜检 证实试验（复发酵试验） 17日: 观察实验现象，统计阳性管数，查MPN表报告结果 进度安排（按GB4789.3-2010） 14日： 配置培养基、分装、灭菌 准备生理盐水、枪头、吸管等耗材，灭菌 样品采集、稀释及接种 16日： 观察实验现象 挑可疑阳性管接种GBLB进行证实试验 18日: 观察实验现象，统计阳性管数，查MPN表报告结果 实验原始数据记录表 问题与思考 1、如何避免放小倒管时产生气泡？ 2、客户要求大肠菌群＜３MPN／ml(g),请问如何检测和报告？ 3、如何从环境、设备及操作等方面保证你所检样品的结果真实可靠？ 4、你分别采用GB4789.3-2010 、 GB4789.3-2010 检测同一品牌珍珠奶茶，结果有无差异？ 请分析。 本次实验课结束 请确保无菌室干净！ 请第三组同学留下值日 实验四 食品中金黄色葡萄球菌的检验 一、目的要求 1 学习测定食品中金黄色葡萄球菌检测的程序和方法 2 了解金黄色葡萄球菌在食品监测中的重要性 二、实验原理 Baird-Parker琼脂原理 氯化锂和亚碲酸盐在该培养基中作为抑菌剂，而丙酮酸钠和甘氨酸则刺激金葡菌的生长。金黄色葡萄球菌有两个明显的特征：1.其产生的脂酶分解了脂肪，在菌落周围形成一不透明的混浊带(沉淀环) ；2.其产生的卵磷脂酶分解了卵磷脂，在菌落周围形成一透明环; 3、因亚碲酸盐中的碲离子被还原成金属碲，菌落呈黑色。 金黄色葡萄球菌的单个菌落在Baird-Parker琼脂平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿 润,直径2～3mm。灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈 (沉淀),其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感 血浆凝固酶实验原理：? 凝固酶是实验室鉴定葡萄球菌致病性的重要试验。致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶，一种是结合于菌体表面并不释放的凝聚因子，称结合凝固酶，它直接作用于血浆中纤维蛋白原，使发生沉淀，包围于细菌外面而凝聚成块；另一种凝固酶是分泌至菌体外，称为游离凝固酶，作用类似凝血酶原物质,被人或兔血浆中的协同因子激活为凝血酶类物质后 ，可使血浆中液态的纤维蛋白原变为凝固的纤维蛋白，从而使血浆凝