专题一兽药毒理学试验和安全性评价.ppt

专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * （2）复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔数有2只或2只以上，可判断为不符合规定。 （3）初复试合并8只家兔的升温总数超过3.5℃，可判断为不符合规定。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 二、中草药注射剂的质量检查 1.急性毒性 中草药注射剂的耐受量应为家畜临床用 量的100倍为安全，60倍以上者可慎用。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 具体方法 取小鼠5 只，尾静脉或腹腔注射0.5ml药液，观察小鼠有无震颤、惊厥、四肢瘫痪、步态不稳、竖毛、呼吸抑制或死亡等反应。 一般观察48-72小时，如有死亡，应另取10只重做，不得有死亡。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 2、溶血试验 含皂苷或鞣质或成分尚未十分明确的中草药注射液必须做溶血试验。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 具体方法 （1）2%兔的红细胞生理盐水的配制 兔耳缘静脉采血1ml，置青霉素小瓶（西林 瓶）中，加玻璃珠搅拌除纤维蛋白，用生理盐水 离心洗涤至上清液澄清为止，然后配成2%混悬 液。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * （2）溶血试验设计表 试管号 1 2 3 4 5 6 7 被试药液 （ml） 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0 0 生理盐水 （ml） 2.4 2.3 2.2 2.1 2.0 2.5 0 红细胞液 （ml） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 蒸馏水（ml） 0 0 0 0 0 0 2.5 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 取洁净试管7支，按上表排列加入各种溶液， 第6管为阴性对照管，第7管为阳性对照管。各管 轻轻摇匀后， 37℃恒温箱或水浴中保温（或25- 37 ℃室温下），开始每隔15分钟，1小时后每隔1 小时分别观察1次，共3小时。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * （3）结果判断 判定标准: 1.全溶血:溶液澄明红色,管底无红细胞残留. 2.部分溶血:溶液澄明红色或棕色,管底有少量红细胞残留. 3.无溶血:红细胞全部下沉,上层液体无色澄明. 4.凝集:虽不溶血,但出现红絮状物,振摇后不能分散.将凝 集物置于载玻片上,盖上盖玻片,从边缘滴加生理盐水,显微 镜下观察,红细胞散开者为假凝集,反之为真凝集. 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 结果判定: 一般认为, 第3管或第3管以前被试药液在30分钟内引 起溶血、部分溶血或出现凝集现象的，不宜作静脉注射 用；不溶血或出现假凝集现象的才可作注射用。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 三、局部刺激性试验1. 家兔点眼法 取健康家兔1只，固定，观察眼结膜色泽和血管分布情况；然后将下眼睑拉成杯状，取被测试药液2滴（10mg/ml）滴入左眼结膜囊内，1分钟后放开眼睑，任药液自溢；右眼同样滴入生理盐水为对照。观察给药后30、60、90、120 mins时结膜有无充血、水肿、畏光和流泪等现象。如无这些现象该药即为合格。本法适用于滴眼剂和其他黏膜用药刺激性的测试。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 三、局部刺激性试验2. 家兔股四头肌法 本试验考察药物制剂，应用于局部组织后，是否引起 红肿、充血、肌肉变性或坏死等刺激反应，以确定该药物 制剂的局部试验是否符合规定。 方法：家兔股四头肌法。选用健康、体重2kg左右的家兔2 只，分别于一侧股四头肌处以无菌操作方法注入受试制剂 2.0ml；另侧相应部位同法注入等容积的灭菌生理盐水作 为对照。48小时后处死家兔，解剖后取出股四头肌，纵向 切开，观察注射部位肌肉的刺激反应。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 注射剂刺激反应评分标准 反应级数 刺激反应 0 给药部位无明显反应 1 给药部位轻度充血，直径在0.5cm以下 2 给药部位中度充血，直径在1.0cm以下 3 给药部位重度充血，红肿，肌肉有变性 4 肌肉褐色变性，坏死，直径在0.5cm以下 5 肌肉严重变性，出现大片坏死 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 结果判定 凡两只家兔的平均反应级数在2以下者，可供 肌注；如平均反应级数在2～3之间者应复试，或 结合其他项目考虑其临床试用问题。 专题一兽药毒理学试验和安全性评价 * 四、过敏性试验 取体重250-350g 豚鼠6只，隔日肌肉注射受试药液 0.2-0.5ml，共三次，然后分两组，每组3只。第一组首次 注射后的第14日由颈静脉注射受试品1-2ml，或腹腔注射 受试品2-3ml。第二组于首次注射后的第21天同样静脉或腹 腔注射受试品