与在人乳腺癌和正常乳腺组织中的差异表达及其意义.docx

谢碧琛：miR-34a、miR-148a与Wntl在人乳腺癌和正常乳腺组织中的差异表达及其意义 谢碧琛：miR-34a、miR-148a与Wntl在人乳腺癌和正常乳腺组织中的差异表达及其意义 l miR-34a、miR-148a与Wntl在人乳腺癌和正常 乳腺组织中的差异表达及其意义 j11 1 1 Illl ill III I rlJ I IPI[I F flllJIIf Y2049957 中文摘要 目 的： 应用文献检索和生物信息库预测，寻找miR-34a、miR-148a参与调控Writl基 因表达的线索，通过分子生物学技术，检测分析乳腺癌组织和正常乳腺组织中 miR-34a、miR-148a的表达变化和Wntl的mRNA及蛋白的表达变化及其相关性， 为阐明miR-34a、miR-148a和Wntl在乳腺癌发病机制中的作用提供依据，为进一 步研究乳腺癌发生的分子机制和乳腺癌基因治疗方法提供新的思路和实验依据。 方法： l、检索相关文献资料并应用生物信息学方法——靶基因预测软件(Pic协、 TargetSean、microRNA．org)预测并分析可能调控Wntl基因的microRNA。 2、半定量反转录PCR(RT-PCR)：收集乳腺癌及正常乳腺组织标本，提取总 RNA,经反转录、PCR、琼脂糖凝胶电泳、凝胶成像分析比较正常组织与乳腺癌组 织中的miR-34a、miR-148a及Wntl的mRNA含量。 3、荧光定量PCR(qRT-PCR)：以人正常乳腺组织和乳腺癌组织总RNA为模板， 反转录后得到miR-34a、miR-148a、Wntl mRNA的eDNA模板；利用SYBR Green Mix和特异性PCR引物对miR-34a、miR-148a、Wntl mRNA相对表达量进行检测 分析。 4、免疫组织化学方法：将人正常乳腺和乳腺癌组织制备成石蜡切片，经过脱 蜡水化、抗原修复、滴加一抗、二抗、DAB显色，利用图像分析软件比较正常与 癌灶组织中Wntl蛋白的相对含量。 5、蛋白免疫印记法(Western．blot)：提取正常乳腺组织以及乳腺癌组织总蛋 白，经电泳、转膜、Wntl抗体孵育、DAB显色，软件分析比较两者中Wntl蛋白 扬州大学硕士学位论文 扬州大学硕士学位论文 2 的相对含量。 结果： l、经过文献查阅以及PieTar、TargetScan、microRNA．org三个软件共同预测， miR-34a和miR-148a可能参与调控阮fJ。 2、半定量RT-PCR和荧光定量PCR表明：乳腺癌组织中的miR-34a、miR-148a 表达水平较正常乳腺组织降低，而Wntl mRNA表达水平较正常乳腺组织升高。 miR-34a、miR-148a与Wntl mRNA的表达都呈负相关。 3、免疫组化和Western-blot表明：乳腺癌组织中Wntl在蛋白水平的表达也高 于正常乳腺组织。 结论： 乳腺癌患者癌组织中miR-34a和miR-148a的下调，可能在转录后水平上调 Wntl mRNA表达，进而导致Wntl蛋白表达水平升高，此种变化在乳腺癌的发生 发展中可能起很重要作用。 关键词：miR-34a，miR-148a，Wntl，乳腺癌，靶基因 谢碧琛：miR-34a、miR-148a与WntI在人乳腺癌和正常乳腺组织中的差异表达及其意义 谢碧琛：miR-34a、miR-148a与WntI在人乳腺癌和正常乳腺组织中的差异表达及其意义 3 The Different Expression of miR-34a、miR-1 48a and Wnt 1 between human breast carcinoma and normal breast tissue Abstract Objective： Look for clues in miR-34a and miR-1 48a target砌“gene by literature searching and bioinformatics．Use molecular biology techniques to analyse the expression and study the correlation between miR-148a、miR-34a and Wntl mRNA、Wntl protein in breast carcinoma tissue and normal breast tissue．Our study will contribute to further research about the function ofmiR-148a、miR-34a andⅥh1 during breast cancer pathog