分子生物学复制.pptxVIP

第三章DNA的复制 一、半保留复制 Semi-conservation replication 以每条链为模板，按碱基互补配对原则由DNA聚合酶催化合成新的互补链。二、复制起点和复制子 Origin of replication (ori) and replicon DNA复制从特定位置开始，即复制起点，然后向两边进行复制。 原核生物DNA分子为一个复制子；而真核生物每个DNA分子有多个复制子，每个复制子长约50-200kb。二、复制起点和复制子 Origin of replication (ori) and replicon 复制起点有特殊的序列结构： A. 反向重复序列，即回文结构(palindrome)，与复制酶系统的识别有关； B. 启动子序列。 C. 呼吸区序列三、半不连续复制 Semi-discontinuous replication DNA生物合成方向为5'→3'延伸合成。 在复制起点向两侧复制形成两个复制叉(replication forks)。 前导链(leading strand)的合成是连续的；后续链(lagging strand)以冈崎片段(Okaxaki fragments)的形式分段合成，再连接。四、参与DNA复制的酶与蛋白螺旋酶 (Helicase) 利用ATP的能量，促使DNA在复制叉打开为单链。 E. coli中一种为螺旋酶I或螺旋酶III，与后续链的模板DNA结合沿5'→3'方向运动；第二种为Rep蛋白，和前导链的模板DNA结合沿3'→5'方向运动。2 单链DNA结合蛋白(SSBP) E. coli的SSBP为四聚体，可结合32 bp。 SSBP使单链DNA呈伸展状态，有利于单链DNA作为模板。 SSBP防止单链DNA重新配对或被降解。DNA拓扑异构酶 (Topisomerase) 催化DNA不同超螺旋状态之间的转变。 A. 拓扑异构酶I ：双链解旋? 切断?形成“酶-DNA“共价中间物 ? DNA连接。不需辅助因子。 B. DNA旋转酶(DNA gyrase)：拓扑异构酶II，引入DNA分子负超螺旋 。需要ATP。?4 引物酶 (Primase) DNA的复制需要RNA引物。E. coli引物酶由dnaG基因编码，60KD，单细胞50-100个分子。 在某些单链噬菌体和质粒DNA复制时，引物的合成是由RNA聚合酶催化的。引物酶与一般RNA聚合酶的区别：（1）对雷米封不敏感，而RNA聚合酶则敏感；（2）可以利用核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸两种底物；（3）只在复制起点处合成RNA引物而引发DNA的复制。 5DNA聚合酶 (DNA Polymerase, DNA Pol)基本特性：（1）以 dNTP为底物催化合成DNA；（2）需要模板和引物；（3） DNA合成的方向是5 ‘ ? 3’ 。A．E.coli DNA聚合酶 I (DNA pol I) 109kD多肽，每个细胞有约400分子。 模板专一性和底物专一性均较差。? 除了聚合酶活性外，DNA Pol I酶还具有： （1）3‘→5’外切酶活性 （2）5‘→3’外切酶活性 DNA聚合酶活性和5‘→3’外切酶活性协同作用，可以进行缺口平移(Nick translation)。B．E.coli DNA聚合酶 II (DNA pol II) 120 kD，每个细胞约有100个酶分子，活性为DNA Pol I的5%。 催化特性：　(1)补平作用：最适模板为双链DNA中间有空隙的单链DNA部分；　(2)具有3'→5'外切酶活性，但无5'→3'外切酶活性。　(3) 可能在DNA的损伤修复中有一定作用。 C．E.coli DNA聚合酶 III (DNA pol III) DNA复制所必需的酶；多种亚基，每个细胞中10-20个分子。 具有3‘→5’和5‘→3’外切酶活性。3‘→5’外切酶活性的最适底物是单链是DNA；5'→3'外切酶活性要求有单链DNA为起始作用底物，但一旦开始后，便可作用于双链区。 功能polⅠpolⅡpolⅢ 聚合作用5'→3'+　+ 外切酶活性3'→5'+++ 外切酶活性5'→3'+++模板及引物的选择　　　 完整的DNA双链－－－ 带引物的长单链DNA+－－ 带缺口的双链DNA+－－ 双链而有间障的DNA+++一般性质　　　 分子量109 kD120 kD＞140 kD 每细胞中的分子量40017-10010-20 结构基因polApolBpolCD．真核生物的DNA聚合酶(1) DNA聚合酶a，300kD，4或5个亚基组成，占总量的80-90%，主要负责染色体DNA的复制。(2) DNA聚合酶b，45kD，单链，主要修复核内DNA。(3) DNA聚合酶g，140kD，负责线粒体DNA的复制。(4) DNA聚合酶δ，与原核