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实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察 【实验目的】 了解细胞骨架的结构特征及其制备技术 洋葱鳞茎内表皮细胞骨架标本的制备和观察 【实验原理】 细胞骨架cytoskeleton是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，有微管、微丝和中间纤维，对于细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起重要作用。 当用适当浓度的TritonX-100处理细胞时，细胞质膜和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝束构成的网状结构，这就是细胞骨架 【实验材料与试剂】 试剂： 1%Triton X – 100（用M-缓冲液配制） M- 缓冲液：咪唑、KCl、MgCl2、EGTA、EDTA、 巯基乙醇（或二硫苏糖醇DTT） 固定液：3% 戊二醛, pH 6.8； 0. 2% 考马斯亮蓝R250 染液； 0. 01mol/l 磷酸盐缓冲液 PBS, pH 6. 8； 材料：洋葱鳞茎内表皮细胞 【实验步骤】 1）撕取洋葱鳞茎内表皮 （约 l cm2 大小若干片）置于装有pH 6.8 磷酸缓冲液的50 ml 烧杯中，使其下沉。 2）吸去磷酸缓冲液，用l%TritonX-100 处理 20 min。 3）吸去TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次7 min。 4）3%戊二醛固定0.5 h。 5）pH6.8 磷酸缓冲液洗三次，每次7 min。 6）0.2%考马斯亮蓝R250染色20 min。 7）用蒸馏水洗 l~2 次，细胞置于载玻片上，加盖玻片，于光学显微镜下观察。 【结果分析】 光镜下可见细胞核和细胞质表面分布着许多排列不规则的纤维束，走向清晰，浅蓝色或深蓝色。也可见到部分细胞骨架纤维并非纤维状，而是呈串珠状或颗粒状，这是由于在固定和洗涤过程中没有将溶解下来的膜蛋白等成分去除造成的。 Triton X-100 处理15 min Triton X-100 处理25 min Triton X-100 处理40 min
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