叶绿体色素的提取分离及其理化性质.pptxVIP

叶绿体色素的提取分离及其理化性质.pptx

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叶绿体色素的提取分离及其理化性质的观察;;植物色素包括: ①??脂溶性的叶绿体色素: 存在于叶绿体,与光合作用有关,如叶绿素、类胡萝卜素等; ②??水溶性的细胞液色素: 存在于液泡中,与花朵的颜色有关,如花青素属黄酮类物质。;二、原理与操作步骤; 叶绿体中含有绿色素(包括叶绿素a和叶绿素b,酯类化合物)和黄色素(包括胡萝卜素(烃类)叶黄素(衍生的醇类))两大类。它们与类囊体膜上的蛋白质相结合,而成为色素蛋白复合体,不溶于水,而溶于有机??剂,故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。;提取的操作步骤:;提取的操作步骤:;乙醇提取液操作步骤: 水研磨匀浆操作步骤:; 因吸附剂(本试验为滤纸)对不同物质的吸附力不同,当用适当的溶剂推动时,混合物中各成分在两相(流动相和固定相)间具有不同的分配系数,所以它们的移动速度不同,经过一定时间层析后,便将混合色素分离。;分配系数; 叶绿体色素的结构决定极性不同,因而在滤纸上的迁移速率不同。;叶绿素的化学结构;烃类;吸附剂:滤纸 推动剂:石油醚:丙酮:苯(10:2:1) ; 步骤: (1)圆形定性滤纸1张(直径11cm),用细头的吸管在其中 心戳一圆形小孔(直径约3mm)。 (2)另取一张滤纸条(5cm×1.5cm),沿纸条长度方向涂色 素,限制在0.5cm,风干后,重复涂抹数次。 沿长度方向卷成纸捻。 涂抹色素要适量,量多拖尾,量少色带看不清。 涂抹色素的技巧方法:将色素放到一块平板玻璃上,涂 抹纸片,这样涂抹的色带窄,分离效果好。 (3)纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中,与滤纸平齐(勿凸出)。;(4)康维皿放置培养皿内,康维皿中央小室中加满 推动剂。 (5)把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿上,使纸 捻下端浸入推动剂中。盖好培养皿(为什么?)。 (6)推动剂到达滤纸边缘时,取出滤纸,风干。 用铅笔标出各种色素的位置和名称。 (7)剪下一部分附到实验报告中。; 注意: 1、色素多涂抹几次,风干后再涂抹第二次。 细,匀,直,浓。 2、涂抹的色素要适量,量多易发生拖尾,量少色带看 不清; 3、纸捻卷紧; 4、色素涂抹的宽度不要超过纸条的二分之一; 5、中心孔要小而圆;平齐,勿突出; 6、分离时一定要盖严,防止推动剂蒸发。; 颜色从外往内分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色。 分别为:?;;(1).光对叶绿素的破坏作用;光对叶绿素破坏的操作步骤: 稀释时不用严格定量? 稀释2-3倍,为什么要稀释?; 水提取液 暗 光; 光下破坏的时间不要过长,否则看不到效果。阴天可以适当延长,时刻观察。 阴天和晚上上课的同学取滤纸一张,将两种液分别涂抹在滤纸上,带回去,放在光下处理。 ; (2)、荧光现象;;;叶绿素的荧光现象;; (3)、皂化作用;步骤: 1、加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液,充分摇匀; 2、加入5ml苯,摇匀 ; 3、加入适量蒸馏水,沿管壁。; 注意:如果分层后下部的溶液浑浊,可以剧烈摇动,对试管加温,溶液很快分层,絮状物消失,溶液变得清澈透明。原因,可能是温度较低引起的。 ;(4)、吸收光谱的观察; 叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性,表现出一定的吸收光谱,可用分光镜检查或用分光光度计精确测定 太阳光不是单一的光,当一束阳光通过三棱镜后,就象雨后的彩虹那样,可分为红、橙、黄、绿、青、蓝、紫七种颜色,形成连续的可见光谱。如果在阳光与三棱镜之间插入一支盛有叶绿素的试管,那么,在光谱中的红光与蓝紫光的部位就会出现很深的黑带,表明这些光线已被叶绿素强烈吸收;而绿光部位没有黑带,也就是未被吸收。因此,叶绿素呈现绿色。胡萝卜素与叶黄素主要吸收蓝紫光,基本上不吸收黄光,从而呈现黄色。;(5)、H+和Cu2+对叶绿素分子中 Mg2+的取代作用;;1#小试管; 加热时试管不能靠近火焰,温度过高将破坏叶绿素。;加热时试管不能靠近火焰,温度过高将破坏叶绿素。 ;?三、 结果记录:填写记载表 ;洗刷干净,器皿摆放整齐 研钵壁上易吸附色素,用什么洗刷? 节约使用试剂; 叶绿体色素的结构决定极性不同,因而在滤纸上的迁移速率不同。;叶绿素的化学结构;烃类;吸附剂:滤纸 推动剂:石油醚:丙酮:苯(10:2:1) ; 光下破坏的时间不要过长,否则看不到效果。阴天可以适当延长,时刻观察。 阴天和晚上上课的同学取滤纸一张,将两种液分别涂

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