细胞增殖及其调控.ppt

第二节 细胞周期的调控;;精品资料; 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”;（一）研究背景 1. MPF 的发现及其作用 　　　1960年，Masui和Markert研究爪蟾卵母细胞，提出了成熟卵母细胞中存在一种促成熟因子（maturation promoting factor，MPF）。　　　　　 Rao和Johnson(1970、1972、1974) 以Hela细胞为材料，发现M期细胞具有某种促进间期细胞进行分裂的因子，即促细胞分裂因子(mitosis- promoting factor ，MPF)。 ;M期细胞(Hela)融合的间期细胞染色体发生凝缩，称为早熟凝集染色体(prematurely condensed chromosome，PCC)。 G1期PCC为单线状，因DNA未复制。 S期PCC为粉末状，因DNA由多个部位开始复制。 G2期PCC为双线染色体，说明DNA复制已完成。 甚至不同类的M期细胞也可诱导PCC产生，说明M期细胞具有促进间期细胞进行分裂的因子，即成熟促进因子(maturation promoting factor， MPF)。;染色体超前凝集（PCC）; 2.cdc基因 　　　Leland Hartwell、 Paul Nurse分别以不同的酵母为实验材料，发现了许多与细胞分裂有关的基因(cell division cycle gene，CDC)。如芽殖酵母的cdc28、裂殖酵母cdc2基因。 如何发现的？ 进一步研究发现：P34cdc2与P34cdc28是同源物，二者本身并不具有激酶活性，只有当其与有关蛋白结合后，其激酶活性才能够表现出来。例如：P34cdc2必须与另一种蛋白P56cdc13结合后才具有激酶活性。 ; 3.cyclin 　　　1983年Timothy Hunt首次发现海胆卵受精后，在其卵裂过程中两种蛋白质的含量随细胞周期剧烈振荡，在每一轮间期开始合成，G2/M时达到高峰，M结束后突然消失，在下一个周期中又重复这一消长现象，故命名为周期素或周期蛋白(cyclin)。随后cyclin很快被分离和克隆出来，证明其广泛存在于从酵母到人类等各种真核生物中，而且在功能上存在互补性。; 4. MPF － P34cdc2－Cyclin ？？ 　　　1988年M. J. Lohka 纯化了爪蟾的MPF，经鉴定由34KD和45KD两种蛋白组成，二者结合可使多种蛋白质磷酸化。　　　　　　　　　　　　　 1990 Paul Nurse进一步的实验证明P34实际上是P34cdc2的同源物，P45是cyclinB的同源物，而且，对于P34cdc2的活性而言，cyclin是必需的。从而将细胞周期三个领域的研究联系在一起。;;MPF的生化成分：含有两个亚单位 MPF =Cdc2+cyclin （催化亚单位+调节亚单位）;*;*;*;*;*;;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;不同类型的CDK/cyclin复合体;酵母中细胞周期的进程主要由单一的CDK（P34cdc2/ cdc28）所控制。多细胞生物中，细胞周期各期之间的转换需要不同的CDK。;*;*;细胞周期各时相MPF、P34、P56的变化;*;;*;*;*;*;*;*;*;CDK1的调节与活化; CAK=CDK1-Activiting Kinase;; 在中期当MPF活性达到最高时，通过一种未知的途径，激活后期蛋白复合体-APC，将遍在蛋白连接在cyclinB上，导致cyclinB被蛋白酶体（proteasome）降解，完成一个细胞周期;·APC介导选择性降解的靶蛋白与Ubiquitin结合 (通过泛素依赖性途径降解) ·APC主要介导两类蛋白降解: Anaphase Inhibitors和Mitotic Cyclin. 前者维持姐妹染色单体粘连, 抑制后期启动；后者的降解意味着有丝分裂即将结束，即染色体开始去凝集，核膜重建。 · Cdc20 和Mad2蛋白位于动粒上，在染色体结合有丝分裂纺锤体前将不能从动粒上释放，由于Mad2与Cdc20结合而抑制APC的活性。所以只有所有染色体都与纺锤体结合后，APC才有活性，才启动细胞向后期转换。 ;;Destruction Box in Cyclins;癌基因和抑癌基因——主要的内在因素’ 外在因素：离子辐射、化学物质作用、病毒感染、温度变化、PH变化等;单细胞生