生物监测课件 项目三 水体中细菌指标的检测 任务三 总大肠菌群的测定.pptVIP

项目三水体中细菌指标的检测任务三 总大肠菌群的测定 主讲人： 生物监测 测定的意义 总大肠菌群的特征 测定方法 计算和报告 任务三 水中总大肠菌群的测定 总大肠菌群:指一群在37℃ 培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。 主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。 总大肠菌群数：每升水样中所含有的大肠菌群数。 【补充环境标准】 生活饮用水:总大肠菌群数每100mL不得检出 水源水： ?只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，总大肠菌群平均每升不超过 1000个 ?经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用的水源水，总大肠菌群平均每升不得超过10000个 地下水质量标准 ： Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类≤3个/L；Ⅳ≤100个/L；Ⅴ>100个/L 任务三 水中总大肠菌群的测定 一、测定意义 作为水体受粪便污染的指标。 二、总大肠菌群的特征 在37℃ 下培养24h可使乳糖发酵，并产酸产气 是革兰氏阴性无芽孢杆菌 在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落 任务三 水中总大肠菌群的测定 三、测定方法 （一）多管发酵法 (1) 生活饮用水 ① 初发酵试验 ② 平板分离 ③ 复发酵试验 阳性管接种在伊红美兰培养基上，37℃培养18～24h，挑选典型特征的菌落，涂片、革兰氏染色、镜检 原水样 各10mL 37℃ 24h ＋ ＋ ＋ ＋ G- G+ 37℃ 18-24h 37℃ 24h 各10mL双料乳糖蛋白胨培养液 根据阳性管的数目查表求出大肠菌群数 5个10mL管中阳性管数 最可能数（MPN） 0 ＜2.2 1 2.2 2 5.1 3 9.2 4 16.0 5 ＞16 用5个10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN） 任务三 水中总大肠菌群的测定 (2) 水源水：将水样作1：10稀释 37℃ 24h 乳糖蛋白胨各10mL 双料乳糖蛋白胨各10mL 水样 1mL 各1mL 各1mL 各10mL 10-1 37℃ 24h 9mL无菌水 任务三 水中总大肠菌群的测定 (3) 地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1000或更高的稀释 MPN值=MPN指数× 任务三 水中总大肠菌群的测定 （二）四管发酵法（以轻度污染者为例） ① 初发酵试验 ② 平板分离 ③ 复发酵试验 革兰氏染色 + _ + + 10mL 水样 25mL 225mL无菌水 1mL 1mL 1mL 10-1 1mL 10-2 37℃ 24h 37℃ 18-24h + + + G- G- G+ 37℃ 24h 查表 任务三 水中总大肠菌群的测定 （三）滤膜法 滤膜是一种微孔薄膜（孔径0.45μm） 过滤水样 ①滤膜及滤器的灭菌 ②过滤装置安装 ③水样量的选择 ④过滤水样 任务三 水中总大肠菌群的测定 培养 结果观察和报告 挑选典型特征的菌落进行革兰氏染色、镜检； 染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌再接种于乳糖蛋白胨培养液中，经37℃培养24h，产酸产气者则判为总大肠菌群阳性 37℃ 24h 任务三 水中总大肠菌群的测定 计数滤膜上生长的大肠菌群菌落总数，根据过滤的水样量计算1L水样中总大肠菌群数。 总大肠菌群数(个/L)= 滤膜上菌落数以20~60个/片较为适宜 感谢观看，欢迎批评指正 * * * *