生物微生物遗传变异和育种菌种衰退复壮和保藏.pptx

第五节 菌种的衰退、复壮和保藏;性状稳定的菌种是微生物学工作 最重要的基本要求， 否则生产或科研都无法正常进行。; 一、菌种的衰退与复壮（一）衰退 1. 定义; 菌种原有的典型性状变得不典型时就称菌种退化，这种变异也称负变（minus mutation）。;例如， 微生物菌落形态或个体形态的变化； 生长速度缓慢，产孢子量减少； 色素产生情况的变化； 研究菌种遗传标记的丢失， 生产菌种生产性状的劣化等。;2. 衰退的原因;3. 衰退的防止;（3）创造良好的培养条件;（4）利用不同类型的细胞进行接种传代;（5）采用有效的菌种保藏方法;（二）菌种的复壮（rejuvenation） 1. 定义;广义的复壮： 在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正变个体。; 通过纯种分离把退化菌种的细胞群中仍保持原有典型性状的单细胞分离出来，扩大培养，就可恢复正常。;纯种分离的方法;（2）通过宿主体复壮;（3）淘汰已衰退的个体;二、菌种的保藏;在一定时间内使菌种不死、不变、不乱;任务： 广泛收集实验室和生产用菌种、菌株、病毒毒株 （有时还包括动、植物的细胞株和微生物质粒等）， 并将它们妥善保藏，使之不死、不衰、不乱， 便于研究、交换和使用。;1. 菌种保藏的原理;2. 菌种保藏的方法;（1）定期移植保藏法;优点：方便，不受条件限制，各类微生物均可。 缺点：时间短、传代多、易退化。;（2）液体石蜡法;加上石蜡可防止培养基水分蒸发，也可隔氧，保藏时间1～2年，除石油发酵微生物外，各类微生物均可使用。;（3）砂土保藏法;优点：低温、干燥、无氧、无营养，保藏效果好，时间可达几年至数十年。 缺点：只适用于产孢子的微生物，不能用于保藏营养细胞。;（4）冷冻干燥保藏法;优点：低温、干燥、无氧、有保护剂，可保藏各大类微生物，保藏时间可达几十年，是目前使用最广、最有效的保藏方法。一般专业机构大都使用此法保藏。 缺点：不能保藏真菌菌丝。;（5）液氮保藏法;（6）基因工程菌保藏;例如，外源DNA插入到质粒pBR322中，重组质粒转化入E. coli中???使其含有Ampr和Tetr，因此在培养基中加入Ampicillin（氨苄青霉素）和Tetacyclin（四环素），即可选出含有质粒pBR322的细胞。;由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法有不同的适应性，迄今为止尚没有一种方法能被证明对所有的微生物均适宜。因此，在具体选择保藏方法时必须对被保藏菌株的特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考虑。对于一些比较重要的微生物菌株，则要尽可能多的采用各种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失败而导致菌种的丧失。; 三、菌种保藏机构（一）国内;下设六个全国性菌种保藏管理中心 1. 普通微生物菌种保藏管理中心 中科院微生物研究所：细菌、真菌 中科院武汉病毒研究所：病毒 2. 农业微生物菌种保藏管理中心 中国农科院 3. 工业微生物菌种保藏管理中心 轻工部食品发酵工业科学研究所 ;4. 医学微生物菌种保藏管理中心 卫生部药品生物检定所：细菌 中国医学科学院皮肤病研究所：真菌 中国医学科学院病毒研究所：病毒 5. 抗生素菌种保藏管理中心 国家医药总局四川抗生素研究所：新抗生素菌种 华北制药厂抗生素研究所：生产用抗生素菌种 6. 兽医微生物菌种保藏管理中心 农业部兽医药品监察所;（二）国外;3. 荷兰;5. 日本;还没有完呢，稍等片刻！; 下节课再见了……;广义的复壮： 在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正变个体。;纯种分离的方法;（2）通过宿主体复壮;（3）淘汰已衰退的个体;任务： 广泛收集实验室和生产用菌种、菌株、病毒毒株 （有时还包括动、植物的细胞株和微生物质粒等）， 并将它们妥善保藏，使之不死、不衰、不乱， 便于研究、交换和使用。;1. 菌种保藏的原理;（6）基因工程菌保藏