第二章蛋白质化学(赏析).pptVIP

第五节 蛋白质的重要性质;1、稳定蛋白质胶体溶液的两个因素∶ (1) 表面电荷(在非等电点时)与双电层； (2) 水化膜 蛋白质胶体溶液具有一般胶体溶液的性质∶ 丁道尔现象、布朗运动、半透膜不透性、 吸附性、胶凝性、粘性。; 2、蛋白质的膜分离技术（Membrane Separation Technique ） 利用蛋白质的半透膜不透性，将蛋白质中所含的、可以通过半透膜将低分子物质(如盐等小分子)分离的技术称为膜分离技术(或膜过滤技术)。 膜分离技术可分为∶透析（dialysis ） 超滤（ultrafiltration ）;第二章蛋白质化学(赏析);第二章蛋白质化学(赏析);超滤膜孔径与截留蛋白质分子量的对应关系; 二、蛋白质的两性解离与等电点 蛋白质中可解离的酸性基团∶ Glu的γ-COOH Asp的β-COOH Tyr的酚羟基 Cys的-SH 碱性基团∶ Lys的ε-NH2 His的咪唑基 Arg的δ-胍基;蛋白质分子的总解离可用下式表示∶ NH+3-P-COOH (P+) NH+3-P-COO- (P+-) NH2-P-COO- (P-) 蛋白质的等电点∶蛋白质溶液在特定的pH下，其分子所带的正、负电荷相等，净电荷为零，这一pH称为 (用pI表示)。 ; 蛋白质的等电点不是一个恒定值，它受溶液的离子种类和离子强度的影响。 蛋白质在纯水中的带电状态不受其它离子的干扰，完全由H+的解离和结合来决定，这种条件下的等电点称为蛋白质的等离子点(isoionic point) 。 蛋白质的等离子点是特性常数。; 蛋白质等电点的大小与其氨基酸组成有关。 对于变性的蛋白质，可由其酸性氨基酸与碱性氨基酸的比例来判断。 对于天然蛋白质，由于其R基团不能完全暴露在外，故不易判断。 ;几种蛋白质的等电点;在等电状态下，蛋白质分子物理性质有所改变，最显著的是溶解度最小。 ;; 根据蛋白质两性解离和等电点的性质发展起来的蛋白质纯化方法有∶ 蛋白质电泳 离子交换法 等电点沉淀法 ;三、蛋白质的变性作用 （ protein denaturation ） 1、概念 天然的蛋白质在受到某些物理或化学因素的作用，有序的空间结构被破坏，致使生物活性丧失，并伴随发生一些理化性质的异常变化，但一级结构并未破坏，这种现象称为蛋白质的变性作用。 ;2、蛋白质变性的可逆性 可逆变性∶是指使蛋白质变性的条件解除 后，能恢复其原有性质。 不可逆变性∶是指使蛋白质变性的条件解除 后，仍不能恢复其原有性质。;蛋白质复性（renaturation）;3、蛋白质的变性因素及其作用机理 物理因素 热、UV、超声波、X-射线、高压、表面张力、搅拌、剧烈振荡、研磨。 例如 皮肤粗糙、白内障、杀菌 化学因素 酸、碱、有机溶剂、重金属盐、脲、胍、表面活性剂、生物碱 。 作用机理 重金属——与-SH生成不溶性的硫化物 浓乙醇、去污剂——破坏疏水作用力; 4、变性蛋白质的性质 变性蛋白质与天然蛋白质性质的差别主要表现∶ (1)理化性质的变化 如：旋光性改变、粘度增加、光吸收性质增加、失去结晶能力、溶解度下降、易发生凝聚和沉淀。 (2) 生化性质的变化 变性后的蛋白质易被酶水解。 (3) 生物活性丧失 这是蛋白质变性的重要标志。; 四、蛋白质的变构作用 （protein allosteric effect ) 对于具有四级结构、含有亚基的蛋白质来讲，当一个亚基的构象发生变化，而引起其余亚基和整个蛋白质分子构象、性质和功能发生改变的作用称为蛋白质的变构作用(或称别构作用）。 如∶血红蛋白的变构作用 ;五、蛋白质的沉淀作用（precipitation） 1、概念 蛋白质胶体溶液的稳定性是有条件的、相对的，若改变环境条件，破坏其水化膜和表面电荷，蛋白质亲水胶体便失去稳定性，发生絮凝沉淀的现象，就称为蛋白质的沉淀作用。 ;蛋白质的沉淀可分为∶ 不变性沉淀∶用于分离活性的天然蛋白质产品。 如： 酶、抗体等。 变性沉淀∶用于生物制品中除去蛋白质。 ;2、沉淀的方法 (1) 等电点沉淀 蛋白质分子在其等电点时，容易相互吸引，聚合成沉淀 (2) 中性盐沉淀 盐析（salting out) ∶在蛋白质溶液中加入高