裸鼠成瘤的一些个人经验.doc

精品 Word 可修改 欢迎下载 最新 精品 Word 欢迎下载 可修改 精品 Word 可修改 欢迎下载 动物实验杂七杂八的做了不少，分享一下目前做的裸鼠成瘤的一些经验，希望和大家相互交流一下，旨在提高一下自己最新这个方面的技能。本人完全是自己根据一些文献，自己摸索，摸着石头过河做的，没得正规的导师知指导，苦~ 本人联系方：(之前本来留个小企鹅的，结果表示文库给我一直都是提交中，苦~望大家在评论中交流哈~) ，希望大家有好的意见和建议，多多交流一下啊！ 下面开始正题： 实验环境：也就是裸鼠饲养环境，由于条件限制，所饲养的裸鼠均为普通级，当然购买的肯定是SPF级哈。 最开始饲养的时候，很担心，因为裸鼠免疫缺陷，会不会动不动就挂了呢！在丁香园不断活跃了一翻。最后根据实际情况总结了一翻目前裸鼠饲养的条件： 首先，裸鼠必须和大小鼠分开，哪怕只是单独的隔一个屏风，大小鼠很容易传染鼠肝炎给裸鼠，裸鼠一旦得了这个病，死是必然的了（当然前提是不会医治哈，若能医疗就另当别论了）。这个病的症状就是：裸鼠皮肤很红，弓背，越来越瘦瘦的成了皮包骨头了。当你发现这个情况出现后，请及时处理掉，不然的话所有的裸鼠都会慢慢得这个病（亲身经历，惨不忍睹啊~） 其次，裸鼠饲养的垫料，当然是要无菌垫料啦，这个应该不难吧，至少一般的高校动物中心都可以购买的啦~如果确实没的这个，可以使用卫生纸作为垫料，前提需要很勤的更换，普通的无菌垫料（松木花什么的）一般来说可以3-5天换一次，用纸的话就得几乎1-2天换了，太麻烦啦~ 再者，饲料和水源的问题，饲料采用无菌饲料这个全国各地都有买的。水源很重要，至少等级为纯净水（就是办公司喝的那种），我现在用的是纯水仪进化的水，嘻嘻~。最新水里面是否加抗生素的问题，本人表示最开始加了一下什么青霉素链霉素等等，该死的还是死，后来不再加了，一样没有问题，主要是饲养环境好就行。 晒一晒我自己的山寨版本的饲养条件：普通储物箱（就是超市里面经常卖的），一个独立的房间，纯水，无菌垫料和饲料。OK 啦~，到目前位置，饲养的裸鼠没有再死掉啦~ 另外最新饲养时间的问题：网上流传的大部分是饲养4个月就不行了~，嗯嗯，本人饲养的一般来说也就3-4个月，但是基本上没有出现问题现在。另外，如果发现裸鼠身上发白，很明显的白灰的话，可以用酒精棉球全身擦拭，一般来说可以控制这个情况。 另外：代养在动物中心的请无视这个！！！！ 裸鼠皮下成瘤： 首先你要确定你的细胞能否成瘤，或者说成瘤效果好不好！这个一定要多查查文献，本人就有不堪回首的经历，使用的细胞基本上没人说过可以成瘤，成瘤了数次均已失败告终，即时有白色的节点，也无法成型，1、2周就消失了。 其次，一般来说细胞接种的量1*107/0.2ml/只，或者浓缩为1*107/0.1ml/只。有的细胞很容易成瘤的话就不必要考虑这么多了，根据个人经验，HEPG-2类，A375类等一些肿瘤类细胞很好成瘤，基本上是100%，我用的是T25培养瓶养满了（80%）可以打2针都能完全成瘤，妥妥的！当然，我这个只是要求成瘤了就可以，不用管其他的哈！ 再者接种的部位，根据个人经验，背部、腋下、颈部均可以，当然腋下和颈部效果最好的啦！接种方法（摘抄）：皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。 这个方法我也是琢磨了很久的~ 肿瘤后续的一些情况（摘抄）： 3.1鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制！！！（这个是否有效，操作起来如何，希望做过的朋友交流一下，本人也在尝试这个操作，希望多多交流。） 3.2肿瘤倍增时间：肿瘤动物实验模型肿瘤的倍增时间（doubling time），应该是在瘤体积100－800之间计算，但是一组动物有10只，每周测量2次瘤体积，如果我想计算从200倍增到400的时间的话，10只动物不会在我测量体积的时候正好到200或400，那么，在计算的时候，具体应该怎么做？ Geddes 等[29]将结节倍增时间的计算公式表示为：DT =（ln 2△ t）/ln（V2/V1），V1、V2分别是前后两次测量的体积，△ t是两次测量的时间间隔 最后，裸鼠成瘤