流式细胞术在白血病中的应用课件.ppt

R1 R3 R2 R4 31 TCRVβ 克隆 32 小结 流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断 – 更加确定的诊断 ? 排除其他疾病 – 有助于细分亚型 ? 更准确的原始细胞辨别和定量 – 有助于预后判断 – 治疗后监测 – 快速 33 免疫表型分析与 FAB 分型基于不同的参数对白血病进行分型，两 者的结果可一致或不一致； 对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异； 对于复杂的病例，需结合多种检查，如特异性染色体核型分析或 融合基因综合判断。 34 MRD 背景 目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形 态学的完全缓解（ CR ）。 但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。复 发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血 病细胞。 如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地 进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。 35 Outline of Leukemic Diagnosis MRD Chemoth erapies Induction Primary leukemi a CR Auto SCT Allo SCT OS Leukemic cells 10 12 100% Morphology: 1-5%, Cytogenetics: 1-5%, Flow cytometry: 0.1-0.01%, RT-PCR: 0.01-0.001% 10 10 1% 10 9 10 8 10 7 ≤ 10 6 0.1% 0.01 0.001 36 37 Molecular Measurements of Treatment Response — Clinical Application (2008 ASH Education Program Book p367) Application 检测治疗早期的反应佳 检测治疗早期的反应差 检测复发 HSCT 前 MRD 评估 Action 加强治疗 无需加强治疗 加强治疗，准备 HSCT 优化 HSCT 的时间 HSCT 后 MRD 评估 临床试验结束时的 MRD 评估 调整免疫抑制治疗时间，等 评价新的抗 ALL 药物或治疗的结果 38 MRD 与预后 当残存白血病细胞 >10 -2 ， 3 年复发率为 76-94% 10 -3 < 残存白血病细胞 <10 -2 , 3 年复发率为 37-53% 残存白血病细胞 <10 -3 , 3 年复发率为 8-20% 残存白血病细胞 <10 -4 , 3 年无复发 39 各种 MRD 检测方法 检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊 表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。这些特征往 往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与 异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。 评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感 性、简单性、重复性和速度。 FCM 免疫表型、 FCM DNA 倍体、 PCR 、 FISH 是较好的方法。 40 MRD 流式分析原则 违背正常分化模式 – 诊断时 ? 辨别出背离正常发育阶段的免疫表型 ? 相对特异的抗原组合 – 随访 ? 辨别出不同于正常免疫表型的不连续群体 ? 以诊断的免疫表型作为出发点 41 流式细胞术在白血病 / 淋巴瘤分型和监测中的应用 世界卫生组织血液肿瘤分类方案（ 1999 年） “ 新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定 疾病的‘真实'本质”。 “这为世界各国肿瘤学家和病理学家提供了一个全新的与令人兴奋的合作交流新 篇章，必将极大促进人们对血液肿瘤的治疗与认识。”（美国临床肿瘤协会，临 床肿瘤杂志 17 卷 3835-3849 页， 1999 年） 更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液 肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。 1 白血病分子诊断的意义 白血病初发 MICM 诊断 系统诊断 异常标记 免疫 / 遗传学靶标 精确诊断 准确预后 指导治疗 科研资料 残留监测 靶向治疗 2 WHO 血液肿瘤新分类实验技术平台 实施 WHO 血液肿瘤新分类方案高 度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生 物学实验技术平台以及掌握这类实验 技能并具有专业知识的人员。 3 4 Investigative Tools for MM diagnosis and Management (2008 ASH Education Program Book p298) Patient Evaluation 诊断 单克隆蛋白数量和特征 血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量 24 小时尿蛋白；总蛋白；本周