流式细胞术在临床科研中的应用.pptx

基于流式细胞术的单细胞分析 在临床及科研中的应用;(一) 流式细胞术的概念 流式细胞术(flow cytometry,FCM)是利用流式细胞仪对生物颗粒包括细胞(红细胞、白细胞、各类组织细胞、血小板等)、微生物以及人工合成微球的多种物理和生物学特性进行定量分析，并能对特定细胞群体加以分选的细胞参量分析技术。;(二) FCM的工作原理 1.荧光染色 (1) 用荧光染料直接染色，如：PI (2) 用荧光抗体间接染色，FITC,PE 2.液流技术：细胞悬液被吸入检测室后，在鞘液的约束下，通过喷嘴，使其形成单细胞悬液。 3.激光技术： 散射光信号 (FS、SS) 荧光信号 (FL1、FL2、FL3、FL4) 4.数据处理;;;;;流式细胞仪检测平台的独特之处;肿瘤学应用（1）-DNA及细胞周期分析;肿瘤学应用（2）-膜抗原分析;肿瘤学应用（3）－细胞凋亡分析;肿瘤的临床应用;DNA细胞周期分析与临床应用; 利用特殊的荧光染料与细胞内DNA碱基结合，被荧光染料染色的细胞在激光照射下发射出荧光，荧光强度与DNA含量成正比。 流式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推算出细胞的DNA含量，解析细胞周期。;DNA检测常用荧光染料;DNA细胞周期分析参数;DNA的倍体和DNA指数的关系;FCM在肿瘤学中的应用-血液标本;FCM在肿瘤学中的应用-脱落细胞;ＤＮＡ倍体检测;赵XX 淋巴结细针穿刺 DNA出现异陪体，CD45阴性，几乎所有标记都是阴性（转移性癌）;颜XX 淋巴结细针穿刺非霍奇金淋巴瘤（弥漫大B细胞型）Ann Arbor分期IIIA期、IPI评分高危组 ;DNA含量的表示;对于一个正常人体的二倍体细胞群，G0/G1期占85-90%以上，S+G2M细胞占10-15%以下。;王XX 超声内镜下胆总管下段刷检涂片（病理诊断：见癌细胞，倾向腺癌） ;周XX 肺泡灌洗液 （右上肺腺癌大小1.8*1.0cm) ; 费XX 尿液 病理高度可疑癌细胞（左肾盂尿路上皮癌，低分化,大小3cm×3cm）， ;蒋XX 淋巴结 （右肺癌伴颈部淋巴结，肝内转移,可能为大细胞神经内分泌癌或分化差癌伴神经内分泌分化） ;王XX 腹水 （ 妇科腹膜间皮瘤）;手术切除的乳腺肿块;DNA细胞周期分析临床意义;DNA细胞周期分析临床意义;DNA细胞周期分析临床意义;肿瘤细胞SPF(S期含量);免疫功能检测;淋巴细胞亚群分析;激活T淋巴细胞: CD3+CD25+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD69+ 诱导性T淋巴细胞： CD3+CD4+CD45RA+ 抑制性T淋巴细胞： CD3+CD8+CD28- 细胞毒性T淋巴细胞：CD3+CD8+CD28+ 记忆T淋巴细胞： CD3+CD4+CD45RA-CD45RO+ 未活化T淋巴细胞：CD3+CD4+CD45RA+CD45RO-;流式蛋白定量技术的应用 （Application of Cytometric Bead Array ）; 正常人体内的Th1类细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-2）与Th2类细胞因子（IL-10、 IL-5、 IL-4）保持着相对的平衡。当这种平衡被打破也预示着疾病的发生，肿瘤的发生也伴随着Th1/Th2的转归与变化。由于细胞因子功能的多效性与细胞因子之间存在相互影响与转化，单个细胞因子的变化难以清楚的判断与肿瘤发生发展的关系，Th1 /Th2的分类使肿瘤细胞免疫学的概念清晰化，近年来研究Th1/Th2两类细胞因子的漂移方向逐渐成为热点。 ;CBA简介;1;Cytometric Bead Array (CBA); CBA与ELISA比较;CBA应用领域;卵巢癌化疗前后Thl和Th2类细胞因子的表达;FCM的相关科研应用;;(二) FCM的工作原理 1.荧光染色 (1) 用荧光染料直接染色，如：PI (2) 用荧光抗体间接染色，FITC,PE 2.液流技术：细胞悬液被吸入检测室后，在鞘液的约束下，通过喷嘴，使其形成单细胞悬液。 3.激光技术： 散射光信号 (FS、SS) 荧光信号 (FL1、FL2、FL3、FL4) 4.数据处理;DNA细胞周期分析参数;对于一个正常人体的二倍体细胞群，G0/G1期占85-90%以上，S+G2M细胞占10-15%以下。; 费XX 尿液 病理高度可疑癌细胞（左肾盂尿路上皮癌，低分化,大小3cm×3cm）， ;免疫功能检测;激活T淋巴细胞: CD3+C