生物化学实验dna琼脂糖凝胶电泳.pptx

DNA琼脂糖凝胶电泳 实验原理 琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型 凝胶 ——分离、鉴定、纯化DNA 影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构 象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成 缓冲液pH>DNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与 分子量对数成反比 DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线 状DNA>开环DNA 不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围 琼脂糖浓度（%） 分离范围（kb） 0.3 5-60 0.6 1-20 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3 琼脂糖凝胶中DNA的观察 溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光 主要实验器材 电泳槽结构 操作步骤 琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 加样：加样端为负极（黑） 电泳：5V/cm 观察：紫外灯下观察，照相 溶 胶 准备胶槽 凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml 铺 胶 凝胶凝固后取出梳子 加缓冲液 准备样品 点 样 电 泳 注意观察溴酚蓝染液的迁移 紫外灯下观察电泳结果 照 相 不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围 琼脂糖浓度（%） 分离范围（kb） 0.3 5-60 0.6 1-20 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3 琼脂糖凝胶中DNA的观察 溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光 电 泳