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实验一 观察DNA、RNA在细胞中的分布(必修一 P26)
实验目的:初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法
实验原理:
甲基绿和毗罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色, 毗罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、此罗红混合染色剂将细胞染色,可以.显示DNA和 RNA在细胞中的分布.
盐酸能够改变细胞膜的通透性,加速染色剤进入细胞,同时使染色休中的DNA和蛋白 质分离,有利于DNA与染色剂结合。
方法步骤:
操作步骤
注意问题
解样
取口腔上皮 细胞制片
载玻片要洁净, 滴一滴质量分
数为0.9%的NaCl溶液
用消毒牙签在自己漱净的「1腔侧壁上 轻刮几下取细胞
将载玻片在酒精灯下烘干
防止汚迹干扰观察效果 保持细胞原有形态
消毒为防止感染,漱口避免取材失败
固定装片(细胞己死亡〉
水解
将烘干的载玻片放入质虽分数为8% 的盐酸溶液中,用300C水浴保温5min
改变细胞膜的通透性,加速染色剂进 入细胞,促进染色体的DNA与蛋白 质分离而被染色
冲冼涂片
用蒸饷水的缓水流冲洗载玻片10S
洗去残留在外的盐酸
染色
滴2滴毗罗红甲绿染色剂于载玻片上 染色5min
两种溶液混合,现配现用
观察
先低倍镜观察,选择染色均匀,色泽 浅的区域,移至视野中央,调节清晰 后才换用高倍物镜观察
使观察效果最佳
实验二 检测生物蛆织中的糖类、脂肪和蛋白质(必修一 P18)
实验目的: 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
实验原理:某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物.产生特定的顔色反应°
可溶性还原糖(如葡萄糖、果精、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的ClliO 沉淀。如:
加热
葡匐糖+Cu(0H)2 葡萄糖酸+CU2OI (砖红色)+HQ,即Cu(OH)2被还原
成CgO?葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
脂肪可以被丹III染液染成橘黄色(或被丹IV染液染成红色)。淀粉遇碘变蓝色.
蛋白质与双缩腺试剂发生作用,产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肽键.在碱性 NaOH溶液中能与双缩腿试剂中的Cu??作用,产生紫色反应。)
实验材料
1 .做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织.如苹果、梨。(因为 组织的颜色较浅,易于观察Q
做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡3~4 小时(也可用篦麻种子)。
做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋淸。
四,实验试剂
斐林试剂(包括甲液:质量浓度为O.lg/mLNaOH溶液和乙液:质量浓度为0.05g/mLCuSO, 溶液).丹III或丹IV染液、双缩脈试剂(包括A液:质量浓度为O.lg/mLNaOH溶液和B液: 质量浓度为O.Olg/mLCuSO,溶液),体积分数为50亥的酒精溶液,碘液、蒸備水。
五、方法步骤:
-)
-)可溶性糖的鉴定
操作方法
注意问题
解释
1.制备组织样液。
(去皮、切块,研磨、过滤)
苹果或梨组织液必须临时制备。
因苹果多酚氧化海含量高, 组织液很易被氧化成褐色, 将产生的颜色掩盖?
2.取1支试管,向试管注入 2mL组织样液。
3.向试管注入ImL新制的 斐林试剂,振荡。
应将组成斐林试剂的甲液、乙液 分别配制、储存,使用前才将甲、 乙液等量混匀成斐林试剂;
切勿将甲液、乙液分别加入苹果 组织样液中进行检测。
斐林试剂很不稳定,甲、乙 液混合保存时,生成的Cu (OH ”在70~C下分解 成黑色CuO和水:
甲■乙液分别加入时可能会 与组织样液发生反应,无 Cu(OH)2 生成。
4.试管放在盛有5O$5°C温 水的大烧杯中,加热约2分 钟.观察到溶液颜色:浅蓝 色f棕色f砖红色(沉 淀)
最好用试管夹夹住试管上部.使 试管底部不触及烧杯底部,试管 口不朝向实验者。
防止试管的溶液冲出试管. 造成烫伤;
模拟尿糖的检测
取样:正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、 检测方法:斐林试剤(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸
3、 结果:(用斐林试剂检测)试管发生岀现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液.未出现 砖红色沉淀的是正常人的尿液。
分析:因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖,与斐林试剤发生反应产生砖红色沉淀, 而正常人尿液中无还原精,所以没有发生反应。
(二)脂肪的鉴定
操作方法
注意问题
解释
花生种子浸泡、去皮.切下一些子 叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴 中.用吸水纸吸去装片中的水。
干种子要浸泡3~4小 时,新花生的浸泡时 间可缩短.
因为浸泡时间短.不易切片, 浸泡时间过长,组织较软,切 下的薄片不易成形。切片要尽 可能薄些,便于观察。
在子叶薄片上滴2~3滴丹【II或丹IV 染液,染色1分钟。
染色时间不宜过长。
用吸水纸吸去薄片周国染液,用 50%酒精洗去浮色,吸去
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