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纤维素水解方法的研究 纤维素水解方法的研究 Tel：0351-4606086E-mail:ncpjg@163.com ShiyanYanjiu 纤维素水解方法的研究 许洪铭，龚倩云 （重庆市西南大学食品科学学院，重庆400716） 摘要：纤维素是葡萄糖聚合物，在自然界中储量极其丰富，在纤维素酶的催化条件下可分解产生二糖或葡萄糖，鉴于纤维素水解发酵生产乙醇对解决能源危机有很大帮助，通过讨论常用的纤维素水解方法以及酶解效率的测定方法，旨在提高纤维素酶解效率。关键词：纤维素；纤维素酶；酶解中图分类号：Q586 文献标志码：A 纤维素是葡萄糖聚合物，在自然界中储量极其丰富，在纤维素酶的催化条件下可分解产生二糖或葡萄糖，目前尚未完全开发利用。我们期望能将地）、最廉价的可球上最丰富（占全球总生物量80％再生资源纤维素转化为能直接利用的能源和资源。目前常用的水解纤维素方法为酸解法，超临界水水解和酶解法，但对于纤维素酶解效率的测定尚无统一的方法，本文对该方法进行了讨论。1 的影响见图2。 30还原糖得率/% 46硫酸质量分数/%◆-滤纸；▲-脱脂棉 图180min、180℃下硫酸浓度与还原糖得率关系 30还原糖得率/% 1.1试验方法 准确称取烘干至恒重的纤维素原料，与稀硫酸 充分混合，定温加热，冷却至室温。采用硫酸作为催化剂，水解液中残留酸用石灰石处理，防止二次污染，用98%硫酸配制0.8%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%和9%浓度梯度的稀酸溶液进行糖化反应以确定最佳硫酸浓度。将水解液转8000r/min），移到50mL离心管中，离心10min（ 将上清液转移到100mL容量瓶中，所得沉淀用蒸馏水洗涤后再离心，所得上清液一并转移至容量瓶中，定容，混匀，作为还原糖待测液。 时间/min--脱脂棉 图2180℃、4%硫酸条件下反应时间对还原糖得率的影响 由图2可知，还原糖得率随反应时间的增加而升高。但这个关系不是无限的，还原糖得率是一个动态数据，随着反应时间的延长，纤维素不断转化为还原糖，但同时大量的还原糖转化为副产物，使还原糖得率不断下降。1.2.3 反应温度的影响 80min、4%硫酸条件下反应温度对还原糖得率的影响见图3。 如图3可知，还原糖得率在80min、4%硫酸的反应条件下2种纤维素都是在170℃条件下还原糖得率最大。 结果与分析酸浓度的影响 在180℃条件下应用不同浓度硫酸处理2种 纤维素原料。80min、180℃下硫酸浓度与还原糖得率关系见图1。 如图1可知，在180℃的反应条件下，4%硫酸是最佳酸浓度。1.2.2 反应时间的影响 180℃、4%硫酸条件下反应时间对还原糖得率 2021农产品加工79 ShiyanYanjiu 30还原糖得率/% 栏目主持人：刘润平 续反应，避免水解产物的裂解和脱水从而提高其产量。超临界和近临界状态下水的性质是不同的，水在前者中的密度、离子积和介电常数都发生了变化，可能是由于水的这些特性不同，所以在两种状态下发生的反应也不同。2.2.3 在无催化剂存在时，纤维素的水解实验条件为25MPa、320℃~400℃。其中在400℃，停留时间为0.01s~0.05s时水解物产率达到65％~77％，转化率为98％~100％，但是葡萄糖产量很低，仅为2.3％~24.2％。所以，在超临界纯水条件下通过调节温度、压力可提高纤维素转化率，但是目标产物的产率不高。通过使用硫酸铜、硫酸亚铁和硫酸镁等硫酸盐为催化剂对纤维二糖在超临界水中的转化进行了研究，结果发现在CuSO4加入量为3.2mol/L时的催化效果最好，纤维二糖的转化率为82.3％~96.7％，葡萄糖的产率为44.6％~51.5％，是无催化剂体系中的3倍~4倍。3 研究人员对纤维素酶使纤维素转化为葡萄糖的过程提出了不同看法。1950年Reese对纤维素酶的作用方式提出了著名的C1~Cx假说，并得到大多数人的支持。C1~Cx理论要点是C1酶首先作用于结晶纤维素，使其改变成可被Cx酶作用的形式，Cx酶随机水解非结晶纤维素，即可溶性纤维衍生物和葡萄糖的-1,4-寡聚糖，葡萄糖苷酶将纤维二糖和纤维三糖水解成葡萄糖。 C1和Cx分阶段水解纤维素的理论尚没得到证实。若先用C1酶作用结晶纤维素，然后将C1酶与底物分开再加入Cx酶，如此顺序作用并不能将结晶纤维素水解，只有当C1、Cx以及葡萄糖苷酶同时存在才能水解天然纤维素。对于纤维素酶的作用机理，目前尚