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免疫室检测项目操作指南
两对半(含HBsAb、 HBeAg 、HBeAb、 HBcAb)
1:取出试剂盒,室温下复温半小时,清点标本数量,从试剂盒中取出对应数量(含阴、阳对照及空白和质控)板条排好。
2:每批次检查设阴阳对照各一孔,对应阴阳对照各50ul,其余孔按顺序加入血清样本50ul,依次加入酶标工作液每孔50ul(注意:HBcAb应稀释30倍后加入,即1.5ml的生理盐水加入50ul的原倍血清)
3:混匀后放置水浴箱孵育30分钟,洗板6次,拍干,加入底物缓冲液、底物液各50ul,混匀后放水浴箱15分钟显色。
4:加入终止液50ul,上机读取结果。
表面抗原
1:取出试剂盒,室温下复温半小时,清点标本数量,从试剂盒中取出对应数量(含阴、阳对照及空白和质控)板条排好。 2:预先在孔内加入25ul稀释液,每批次检查设阴阳对照各一孔,每孔对应阴阳对照各75ul,其余孔按顺序加入血清样本75ul。 3:混匀放置水浴箱孵育60分钟,取出后直接加入酶标工作液50ul,混匀继续水浴30分钟,然后洗板6次,拍干。 4:各孔加入底物缓冲液、底物液各50ul,混匀后放水浴箱30分钟显色,最后加入终止液,上机读取结果。
HIV、梅毒、丙肝
1:取出试剂盒,室温下复温半小时,清点标本数量,从试剂盒中取出对应数量(含阴、阳对照及空白和质控)板条排好。
2:丙肝各孔预先加入稀释液100ul,再加入血清样本10ul,阴阳对照孔不需要加稀释液,直接加入阴阳对照各100ul。梅毒和HIV每孔加入对应的样本或对照各50ul。
3:混匀后水浴60分钟,取出洗板6次,拍干,丙肝加入100ul酶标工作液,梅毒和HIV各加入对应酶标工作液50ul,混匀继续水浴30分钟,取出洗板6次,拍干。
4:分别加入底物缓冲液、底物液各50ul,混匀显色30分钟,加入50ul终止液,上机读取结果。
EB病毒二项
1:取出试剂盒,室温下复温半小时,清点标本数量,从试剂盒中取出对应数量(含阴、阳对照及空白和质控)板条排好。
2:每孔加入血清稀释液100ul(阴阳对照不需要),然后加入血清样本10ul,阴阳对照各100ul,混匀水浴后放置30分钟,取出洗板5次拍干,各孔加入酶标工作液50ul,混匀继续水浴30分钟。
3:取出洗板5次拍干,先后加入底物、显色剂各50ul,显色15分钟,判断结果。
优生十项
1:取出试剂盒,室温下复温半小时,清点标本数量,从试剂盒中取出对应数量(含阴、阳对照及空白和质控)板条排好。
2:各孔分别加入对应的血清稀释液100ul(阴阳对照不加),然后加入血清样本10ul,阴阳对照100ul。
3:混匀后水浴45分钟,取出洗板5次,拍干,各孔加入对应的酶标工作液,继续水浴45分钟,取出洗板,拍干。
4:加入底物、显色剂各50ul,37℃显色15
TPPA(梅毒确证实验)
1:准备好反应板,取出试剂盒,室温复温半小时。
2:操作流程如下表所示:
血清稀释液
孔1
孔2
孔3(阴性对照)
孔4(判断结果)
100ul
25ul
25ul
25ul
血清
25ul
25ul(前一孔)
25ul(前一孔)
25ul(前一孔)
未致敏颗粒
无
无
25ul
无
致敏颗粒
无
无
无
25ul
最终稀释倍数
1:5
1:10
1:40
1:80
3:操作过程中,血清与稀释液混匀要彻底,倍比稀释过程也要注意混匀,加样枪应来回吸吹20次以上,孔4血清稀释完后吸出25ul弃去。
4:判断结果:加样完毕后,在室温下避光放置2小时后判断结果,注意放置过程切勿晃动反应板。判读结果时应取白色背景,方便识读。若阴性对照孔的结果出现阳性,此次试验无效,应查找原因从做。
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