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* 超声波破碎细胞的常见问题有哪些 试验箱 / * 大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。 细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min就可以。 * 在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，zui后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。 1.会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm(我一般是距底部0.5mm)。功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。 2.破3S停10S，破个二三十次看看。 * 3.变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在破碎时试着加大体积,强度zui好不要超过60%. 4.尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，zui好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。 * 链霉菌(放线菌)超声破碎的，用的方法条件是什么? 前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。 使用超声破碎时采用的具体条件是： (1)取细菌的24h培养液于5000r/min下离心5min收集菌体. (2)用pH7.5的Na2HPO-NaH2PO缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液.置于40mL大塑料试管内. * (3)将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎(功率200W，1/2”探头，破碎30s，间歇30S). (4)破碎液于12000r/min下高速冷冻离心30min，收集细胞碎片和上清夜. * 谢谢观看
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