初始污染菌实验方法验证完整版.docx

HEN system office room [HEN 16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688] 初始污染菌实验方法验证方案 产品名称：—次性包皮环切缝合器 编制： 日期： 审核： 曰期： 批准： 日期： 江西狼和医疗器械股份限有限公司 目录 初始污染菌实验方法验证方案 概述 验证目的 职责与验证申请 4 .验证依据 验证计划 验证内容 初始污染菌实验方法验证方案 概述： 初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品 热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证’确认其有效性及检测准 确性，从而优化产品灭菌丄艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。 目的： 通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。 职责与验证申请： 质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 生产技术部负责按验i正方案生产相关样品 初始污染菌实验方法验证申请表 验证组 姓名 职务 单位 黄燕 组长 质量管理部经理 江西狼和医疗器械股份有限公司 龙章宏 组员 化验员 组员 化验员 胡梓鹏 组员 化验员 批 准 经研究：同意以上成员组成验i正小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方 法进行验证。 批准人： 年 月 日 依据： 《中国药典》2015版 验证计划： 实验操作人员确认； 实验室实验设备及器材的确认； 产品取样及方法确认。 验证内容： 菌种和菌液制备 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 菌液制备 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽泡杆菌的培养物至胰酪大豆豚液体培养 基中或胰酪大豆豚琼脂培养基上，30735-C培养18?24小时：接种白色念珠菌的培养 物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25C培养2-3天，上 述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白豚缓冲液或%无菌化钠溶液制成毎1ml菌数小 于100cfu(菌落形成)的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基 上，20?25°C培养5?7天，加人3?5 ml %(ml/ml)聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白腺缓 冲液或%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出徇子悬液至无菌 试管内，用* (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白豚缓冲液或覺无菌氯化钠溶液制成 每1ml抱子数量小于lOOcfu的泡子悬液。 菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用：若保存在2?8 °C在24h内使用。 黑曲霉抱子悬液存在2?8°C,在验证过的仁存期内用。 计数培养基适用性检査 需氧菌的计数 分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽泡杆菌、白色念珠菌、黑曲霉 各菌悬液，接种至胰酪大豆豚液体培养基管或胰酪大豆豚琼脂培养基平板。金色葡萄 球菌、铜绿假胞菌、枯草芽池杆菌在30-35°C,培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲 霉在20-25°C,培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2管或2个平1IIL。同时，用 相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 霉菌和酵母菌的计数 分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25-C,培养不超过5天。毎一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时，用相应 的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围 内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致：被检液体培养基管与对照培养基 管比较，试验菌应生长度好。 试验结果见表1 计数方法验证 供试液的制备： 洗脱液用％的灭菌生理盐水，检品液制备在10000级环境中进行。 接种和稀释 按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。所加菌液 的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检岀，首先应选 择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。 （1） 试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液 或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于lOOcfUo （2） 供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。 （3） 菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组 操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。 若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行 方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。如果供试品对微 生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理 后再加入试验菌悬液进行方法适应性试验。 抗菌活性的去除或灭活 供试液接种后，按下列“微生物回收”规定的方